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- 技术资料
- 英文名:
NAD/NADH-Glo™ Assay
- 供应商:
普洛麦格
- 规格:
10 ml
NAD/NADH-GloTM Assay 是一种均质的化学发光检测试剂盒,能够检测总的氧化型和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+ 和NADH),并确定NAD+ 和NADH 在生物样品或特定酶学反应中的比值。NAD 循环酶用于将NAD+ 转换为NADH。在NADH 存在时,试剂盒所提供的还原酶将proluciferin( 还原酶底物) 还原成萤光素。萤光素通过Ultra-GloTM 重组萤光素酶定量,反应产生的光信号正比于样品中的NAD+ 和NADH 的量。NAD 循环酶和还原酶所驱动的NAD+ 和NADH循环增加了检测的灵敏度和选择性,使得试剂盒只检测非磷酸化的NAD+ 和NADH,而不会检测磷酸化形式的NADP+ 和NADPH。NAD循环酶、还原酶和萤光素酶反应是通过将等体积的NAD/NADH-GloTM Detection Reagent 加入NAD+- 或NADH- 样品中而被启动,检测试剂中包含NAD 循环酶和底物、还原酶、还原酶底物和Ultra-GloTM rLuciferase,同时检测试剂中存在的去污剂可将细胞裂解,这样通过加入单一试剂即可检测多孔板中细胞内总NAD+ 和NADH 的含量。另外,我们也提供了可单独测量NAD+ 和NADH、计算NAD+和NADH 比例的操作手册。简单的“加样- 混合- 检测”操作方案和
灵活、可扩展的检测方法使得NAD/NADH-GloTM Assay 非常适合高通量筛选小分子化合物对NAD 和NADH 水平的影响。
特点:
. 高灵敏度:可直接检测细胞孔中总NAD+ 和NADH 含量,对细胞数量要求更少,无需样品制备。
. 一步法、均质检测:只需在96 或384 孔细胞培养板中加入单一检测试剂,即可直接检测总NAD+ 和NADH。另外还提供简单的细胞培养板内分别测定NAD+ 和NADH 的操作方案。
. 线性范围宽:可检测10nM 至400nM 的NAD+ 或NADH。该试剂盒检测100nM 的信号值高于背景值五倍以上,且window ( 最大信噪比) ≥ 100。
. 易于自动化:操作方案兼容自动化和高通量检测。反应体系可调,支持96 、384 和1536 孔板检测。
. 可靠、具有良好的可重复性:NAD/NADH-GloTM Assay 在通常实验中的Z' 因子值>0.7。
. 基于发光的NAD+ 和NADH 检测:避免了荧光检测方法中常见的试剂和待测化合物的荧光干扰。
储存条件:将所有组分储存于-20℃ (-30℃至 -10℃ )。
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文献和实验*** Make sure the agar equilibrates to 55 C to 60 C before starting the assay; otherwise it will kill the cells. 3. Distribute several paper disks (Difco, #1599-33-6) into a sterile petri dish, and spot either 5 or 15 of synthetic alpha-factor (1 - 5 mg
Steady State ATPase Assays Coupled Enzyme System
340 at 10 second intervals for 300 seconds. A rate factor of 6.220 x 106 cm2 at 340 nm = molar extinction coefficient of NADH can be entered into the data collection program. 4. Wash and invert 4 cuvettes to dry
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