pUM19-T Vector TA克隆载体报价

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应pUM19-T Vector TA克隆载体报价，产品信息：

类别：克隆与表达

产品名	产品编号	包装规格
pUM19-T Vector TA克隆载体	SY0022	5μg

产地：国产|进口

编号：SY0022

规格：5μg

品牌：百奥莱博

pUM19-T载体是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。

1.将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。

2.按下表配置连接反应体系

ddH2O——To 10 μl

10×Ligase Buffer——1 μl

pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1μl (约0.025 pmol)

插入片段*——0.075 pmol～0.25 pmol

T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl

注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。

3.对照反应体系（可选）：

ddH2O——6 μl

10×Ligase Buffer——1 μl

pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1 μl (约0.025 pmol)

500 bp control insert(50 ng/μl)——1 μl (约0.15 pmol)

T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl

4.轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。

5.转化：

1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。

2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。

3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。

4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

注：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

储存条件：-20℃。

注意事项

1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。

2) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

pUM19-T Vector TA克隆载体报价专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
SY0501	细胞凋亡与增殖	Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒
SY0415	蛋白质研究	27mm透析袋(透析分子量50kDa)
SY0387	蛋白质研究	透明质酸酶
SY0315	蛋白质研究	RIPA裂解液(弱)
SY0642	一抗	小鼠抗His-tag单克隆抗体
SY0103	报告基因检测	SRE-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0674	二抗	Alexa Fluor 647标记山羊抗兔IgG(H+L)
SY0487	细胞凋亡与增殖	体内巨噬细胞清除剂(阴离子氯氟松)
SY0553	探针标记及检测	细胞膜可渗透钙离子荧光探针
SY0133	报告基因检测	MEF3-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0620	培养基配套试剂	3-吲哚乙酸
SY0328	蛋白质研究	组织/细胞线粒体分离试剂盒
SY0145	报告基因检测	STAT6-Luc报告基因质粒
SY0108	报告基因检测	Rb-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0183	报告基因检测	c-Jun-GFP报告基因质粒
SY0034	核酸扩增(PCR)	热启动PCR Master Mix(含染料)
SY0640	一抗	HRP标记小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体
SY0451	蛋白质研究	牛血清白蛋白(标准级别)
SY0739	二抗	Alexa Fluor 594标记驴抗豚鼠IgG(H+L)
SY0055	核酸扩增(PCR)	鸟苷三磷酸溶液(100 mM)(GTP)
SY0087	报告基因检测	EGR1-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0517	其他培养基	氢化可的松
SY0245	核酸电泳和回收	绿色核酸染料(10000×水溶液)(同DuGreen、GelGreen)
SY0370	蛋白质研究	8%-16%梯度预制胶，12孔
SY0120	报告基因检测	BMP-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0214	报告基因检测	ERRβ-GFP报告基因质粒
SY0354	蛋白质研究	4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8

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