pUM19-T Vector TA克隆载体

特别提示：包括pUM19-T Vector TA克隆载体在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pUM19-T Vector TA克隆载体

产品货号：pUM19-T Vector TA克隆载体
产品规格：5μg

pUM19-T载体是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。

1.将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。

2.按下表配置连接反应体系
ddH2O——To 10 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1μl (约0.025 pmol)
插入片段*——0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl
注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。

3.对照反应体系（可选）：
ddH2O——6 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)——1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl

4.轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5.转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
注：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

储存条件：-20℃。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

除了pUM19-T Vector TA克隆载体,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN60106	平末端DNA加T试剂盒	50次
BTN130558	大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞	0.1mL*10
BTN140388	酿酒酵母NMY51感受态细胞	10×100μL
BTN60206	氨苄青霉素溶液	10mL
BTN120690	红霉素溶液	10mL
BTN120693	丝裂霉素*(代"C")溶液	1mL
BTN120683	羧苄青霉素钠溶液	1mL
BTN100838	遗传霉素(G418)干粉	100mg
YT442	pGL6报告基因质粒	1μg
ALH351	通用型T载体克隆菌落PCR检测试剂盒	80次|400次
RFT108	2×ligation solution MasterMix	150μl
RFT166	DH5α化学感受态细胞	20×100μl
SY0276	IPTG	5g
JN0108	pBalbTrx-Tev质粒	20次(1μg)
JN0126	BL21(DE3)感受态细胞(pKJE7分子伴侣)	100μl×10
QN1063	pEGFP-N3 哺乳动物细胞表达载体	20μl
QN1064	RNase H	600U
MQ0005	T1化学感受态细胞	20×100μl/100×100μl
MQ0025	DH5α电击感受态细胞	5×50μl/20×50μl
MQ0030	DH10B电击感受态细胞	5×50μl/20×50μl
MQ0039	BL21(AI)化学感受态细胞	10×100μl/50×100μl
MQ0061	LBA4404农杆菌电转感受态细胞	10×50μl/50×50μl
MQ0064	Y2HGold酵母感受态细胞	10×100μl/50×100μl
BTN160684K	零背景平末端克隆试剂盒(Kan抗性)	25次