X-gal溶液 克隆与表达

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")X-gal溶液 克隆与表达，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：X-gal溶液 克隆与表达
品牌：百奥莱博
规格：10mL
英文名：X-Gal Solution
产地：国产|进口
编号：BTN80910
本产品为浓度为20mg/mL的无色液体。X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈现蓝色。其原理如下：

由于许多常用的克隆质粒载体的多克隆位点都是通过定点诱变的方法被安置在lacZ基因中，所以如果在培养基中加入IPTG诱导剂和X-Gal，则就可以根据菌落的颜色判断菌落中质粒是否携带插入片段(克隆成功与否)。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。

我公司的X-gal溶液 克隆与表达，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·DNA marker(50-500bp)
编号：BTN70503A
英文名称：DNA ladder(50-500bp)
规格：50次
 本系列产品用作凝胶电泳中双链线状DNA的分子量大小参照。它们是由一系列大小不同的单一DNA片段混合组成。成分中已经含有上样缓冲液，所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。每次加样量为5μL，可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：直接上样电泳，每次加样量为5μL。

使用效果：

注：250bp条带为20ng/uL,其余每条带为10ng/uL

疑难解答：
a)如对带型要求较高，建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液，电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液，电压为80V)，同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖，同时要经常更换电泳缓冲液。
c)本产品条带均匀，亮度相当，但在EB胶中长时间电泳有可能会出现250bp以下的条带变淡。可以通过先电泳再染色，加大EB浓度等方法解决。


X-gal溶液 克隆与表达关键词：BTN80910,X-gal溶液,X-Gal Solution


·一站式Tricine-SDS-PAGE套装
编号：BTN81205
英文名称：One-Stop Tricine-SDS-PAGE Pack
规格：30次

·动物线粒体纯化试剂盒B(精提)
编号：BTN111207B
英文名称：Animal Mitochondria Purification Kit(B)
规格：5次
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。


X-gal溶液 克隆与表达关键词：BTN80910,X-gal溶液,X-Gal Solution


·一步式细菌DNA提取试剂盒
编号：BTN60806
英文名称：One-step Bacteria DNA extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在一步裂解式超快细菌基因组DNA提取试剂，其最大特点是快速，可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程不到10分钟(对一个样品而言)。
2.产率一般在3-10μg/mL过液培养细菌。
3. OD260/280一般在1.8以上。
4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
5.适用范围广，可以使用于绝大多数细菌。
6. 也可以使用过夜培养细菌和菌落。
7. 得到的DNA可以直接用于PCR，酶切或其他分子生物学实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶菌酶	600mg
一步式细菌裂解液	25ml
专用上柱液	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(溶菌酶需要冰袋运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一: 对革氏阴性细菌
1. 如果一步式裂解液产生沉淀，需要65℃预热直到沉淀溶解，摇匀待用。
2. 将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心中，室温12000rpm离心1分钟沉淀细菌，弃上清。
3. 加入0.5mL一步式细菌裂解液到离心管中，吹打混匀。
4. 加入0.5mL专用上柱液到裂解液中，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
5. 12000rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
6. 将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
7. 重复第6步操作一次。
8. 空甩半分钟，将离心吸附柱转移到新的离心管中。
9. 加50-100μL DNA洗脱液，室温放置3～5分钟。
10. 12000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。

二: 对革氏阳性细菌
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的细菌离心1分钟后，重悬于0.6mL溶菌液中(60mL自备超纯水+600mg溶菌酶)，颠倒混匀5-10次后37℃保温30分钟(有的菌种可能需更长时间，需要自己根据细菌不同而决定)。
2. 12000rpm离心10分钟，小心弃上清。
3.后续处理接革氏阳性细菌处理的第3步。

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