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- 2026年01月12日
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定量N糖基化蛋白质组分析
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APT
产品定义
蛋白质的N-糖基化位点修饰是最重要的蛋白质翻译后修饰之一，主要在复杂的多细胞或组织形成过程中起关键作用。蛋白质的N-糖基化修饰位点具有保守的氨基酸序列NX（S/T），其中X为除脯氨酸以外的其它氨基酸。
技术原理
凝素亲和法是目前糖蛋白质组学中应用最广泛的分离富集方法。凝集素（lectin）是一类糖结合蛋白质，能专一识别某一特殊结构的单糖或聚糖中特定的糖基序列而与之结合，它们与糖链可逆非共价结合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕获之后，通常用特定的单糖通过竞争结合凝集素将糖蛋白或糖肽洗脱下来。蛋白质经过酶解后利用凝集素（lectin）富集N-糖基化肽段，然后用N-糖酰胺酶（PNGase）在H218O中切除连接在天冬酰胺残基（Asn）上的糖链。该处理致使Asn分子量增加2.9890Da。最后用高精度LC-MS质谱仪检测脱糖后的肽段，并通过MASCOT软件检索数据库，确认脱糖后分子量与其理论分子量的变化以及糖基化修饰肽段的序列，从而确定该蛋白质的N-糖基化位点。
N-糖基化位点确定之后，再利用label-free的原理对其进行定量分析。
实验流程
使用仪器
Thermo Scientific Q Exactive
技术优势
大规模的蛋白质组N-糖基化位点的鉴定与分析。
应用领域
● 疾病机理研究 ● 信号转导途径分析
样品要求
| 样品类型 | 样品要求 |
| SDS-PAGE条带 | 5个以上可见考染条带 |
| 溶液（目标蛋白质） | 目标蛋白质总量>50μg 目标蛋白质纯度>80% |
| 溶液（大规模蛋白质组） | 浓度>1μg/μl，蛋白总量>1mg |
技术参考案例
[1] Zielinska DF, Gnad F, et al. Mapping N-glycosylation sites across seven evolutionarily distant species reveals a divergent substrate proteome despite a common core machinery. Mol Cell. 2012; 46(4): 542-8.
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文献和实验本节课程介绍了label-free定量蛋白质组学技术的原理及应用。主要包括：（1）以MS数据为例，系统介绍label-free技术进行蛋白质定量的技术流程和原理。（2）介绍免费的label-free分析套件—Maxquant和Perseus。（3）以免疫沉淀（IP）数据为例，展示label-free进行蛋白质互作定量的应用。（4）以数据为例，展示label-free在外泌体蛋白定量分析中的应用。
、260nm、280nm和310nm波长下读数，还可扫描动态吸收图谱。 三 结果与分析 1. 完整的RNA的甲醛电泳可明显地观察到28S和18S两条带(见图3.1)，并且28S大约是18S的两倍宽。若两条带不明显, 则说明RNA部分降解,可能的原因是污染了RNase, 或操作剧烈。 2. 定量测定DNA或RNA，应选260nm、230nm、 280nm和310nm波长读数。其中260nm读数用来估算样品中核酸浓度，310nm为背景吸收值。1个OD260值相当于40μg/mLRNA。样品浓度（μg
定量蛋白质组学分析 定量蛋白质组学分析（Quantitative Proteomics）是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白，结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能，同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记（Label）和非标记的（Label Free）定量策略。 定量蛋白质组学技术常见的几类主要包括：Label Free定量蛋白组分析、SILAC与免疫
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