PLANTeasy 植物RNA提取试剂

PLANTeasy 植物RNA提取试剂

编号：KL1201
规格：20ml|100ml
适用范围：适用于富含多糖、多酚植物总RNA 抽提
产品储存：室温运输，4℃保存，可保存6个月
产品介绍：
PLANTeasy试剂可从植物组织，特别是富含多酚或淀粉的植物组织中， (如马铃薯块茎，白松松针或嫩苗，和西红柿叶等），提取高纯度的总RNA。每100 ml可处理100 mg组织200次，处理5 g组织4次。
操作方法：
准备试剂：液氮，研钵，无RNase 离心管，5M NaCl，氯*(代"仿")，异丙醇，75％乙醇，无RNase 水。
样品处理：
a. 先将无RNase 离心管置于干冰中再放入研磨好的冷冻的组织样品。
b. 准备新鲜植物组织，在液氮中研磨成粉状，如果是干种子，可在室温研磨。
c. 处理过的植物材料应一直保持置于－70℃冷冻保存，直至加入提取试剂并悬浮。
1. 小规模提取操作步骤：（样品<0.1g ，使用小规模提取方法）：
1) 取不多于0.1 克冷冻的研磨过的植物组织，加0.5ml 提取试剂（4℃），振荡至彻底混匀。
2) 室温放置5 分钟。注意：平放离心管，使表面积最大。
3) 室温12，000 rpm 离心1 分钟，上清转入新的无RNase 离心管。
4) 加0.1ml 5M NaCl，温和混匀。再加0.3ml 氯*(代"仿")，上下颠倒混匀。
5) 4℃ 12，000 rpm 离心10 分钟，取上层水相转入新的无RNase 离心管。如果提取富含多糖多酚的植物，可以加入0.3ml 氯*(代"仿")再抽提一遍。
6) 加与所得水相等体积的异丙醇，混匀，室温放置10 分钟。
7) 4℃ 12，000 rpm 离心10 分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加1ml 75％乙醇。（沉淀可能很难看见，应小心操作。）
8) 4℃5，000 rpm 离心3 分钟。倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出，室温晾干2-3 分钟。
9) 加50μl 无RNase 水，反复吹打混匀以充分溶解RNA。如有絮状物，可室温12，000 rpm 离心1 分钟，取上清转入干净的无RNase 离心管中。－70℃保存。
2. 大量提取操作步骤（样品>0.1g到5g，使用大量提取方法）：
1) 每1 克冷冻的研磨过的植物组织，加5ml 试剂，振荡至彻底混匀。
2) 室温放置5 分钟。注意：平放离心管，使表面积最大。
3) 4℃ 10，000 rpm 离心1 分钟，上清转入新的无RNase 离心管。每10ml 上清加2ml 5M NaCl，混匀。
4) 每10ml 上清加6ml 氯*(代"仿")，上下颠倒混匀。
5) 4℃ 10，000 rpm 离心15 分钟，取上层水相转入新的无RNase 离心管。如果提取富含多糖多酚的植物，可以加入6ml 氯*(代"仿")再抽提一遍。
6) 测量所得水相体积，加0.9 倍体积异丙醇，混匀，室温放置10 分钟。
7) 4℃ 10，000 rpm 离心15 分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加5－10ml 75％乙醇。
8) 4℃ 5，000 rpm 离心5 分钟。小心倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出弃掉，室温晾干3-5 分钟。
9) 根据沉淀大小加无RNase 水，反复吹打混匀充分溶解RNA（如每1g 叶片可加200μl水）。如有絮状物，可室温12，000 rpm 离心1 分钟，取上清转入干净的无RNase离心管中，－70℃保存。