相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
99
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京诺博莱德科技有限公司
- 保存条件:
已收到实际货物为准
| Trizol(总RNA提取试剂) |
TRIpure 是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。本试剂适用范围广泛,可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。 该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在TRIpure中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层红色有机相,RNA 分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、体外翻译等。
TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb(28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb,18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。
试剂盒组成、储存、稳定性:
| 试剂盒组成 | N4802 |
| TRIpure (4℃避光) | 100 ml |
本品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触,应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
| Trizol(总RNA提取试剂) |
提示:用TRIpure 抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明,所有的操作应该在在15~30°C的室温条件下。
1)匀浆
a:植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIpure中迅速研磨,每50-100mg组织加入1ml TRIpure,混匀。注意:样品体积一般不要超过TRIpure体积的10%。
b:动物组织:取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎,每30-100mg组织加入1ml TRIpure,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIpure 1ml混匀。注意:样品体积一般不要超过TRIpure体积的10%。
C:单层培养细胞:尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml 的TRIpure覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIpure量(每10cm2加1ml)。当TRIpure量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出全部RNA,继续做即可。
d:细胞悬液:离心收集细胞。在TRIpure试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的TRIpure。在加入TRIpure前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
- 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
- 可选步骤: 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟,取上清。
- 每1ml TRIpure加0.2ml氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。
6)将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。
RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
- 在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟,弃上清。
- 加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1mlTRIpure用1ml75%乙醇对沉淀进行洗涤。
注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
10)室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μl RNase free water,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。
| Trizol(总RNA提取试剂) |
TRIpure在室温下能稳定保存12个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在2~8°C的环境下。
注意事项:
1)样品用TRIpure匀浆后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成cDNA,Northern Blot等。
2)若下游实验对DNA非常敏感,建议用 RNase free DNase I对RNA进行处理。
3)自备试剂:氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、 RNase free water或者DEPC处理过的水。
4)本公司生产TRIpure Reagent质量优异,可以完美替代Invitrogen的Trizol Reagent。提取质量和下游实验完全一样。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验TRIzol RNA 提取 试剂 盒是由 GIBCO BRL 公司推出专供提取 RNA 的产品,其操作方便、快捷。 (一) 试剂 准备 1 . TRIzol 试剂。 2 .氯仿 3 .异丙醇 4 . 75% 乙醇( DEPC H 2 O 配制) 5 . DEPC H 2 O
有降解。 常见问题 一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2.如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,然后匀浆。
要勤换。 6. 设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用。 动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类. 动物. 植物. 微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。 RNA可直接用于Northern斑点分析,斑点杂交, Poly(A)+分离,体外翻译,RNase封阻分析和分子克隆。 在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80
技术资料暂无技术资料 索取技术资料








