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Trizol(总RNA提取试剂) NobleRyder N4

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  • NobleRyder
  • N4802
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  • 2025年12月19日
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    • 供应商

      北京诺博莱德科技有限公司

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    Trizol(总RNA提取试剂)
    产品简介:
    TRIpure 是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。本试剂适用范围广泛,可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在TRIpure中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层红色有机相,RNA 分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCRReal-time RT-PCRNorthern blotDot Blot、体外翻译等。
    TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7kb15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNAhnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb(28S)~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.10.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNATE稀释时其A260/A280比值≥1.8注意如果是普通琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大
    试剂盒组成、储存、稳定性:
    试剂盒组成 N4802
    TRIpure  4避光 100 ml
    重要提示:
    本品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触,应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
    Trizol(总RNA提取试剂)
    RNA抽提操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
    提示:TRIpure 抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入如无特殊说明,所有的操作应该在在15~30°C室温条件下。
    1匀浆
    a:植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIpure中迅速研磨,每50-100mg组织加入1ml TRIpure,混匀。注意:样品体积一般不要超过TRIpure体积的10% 
    b:动物组织:取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎,每30-100mg组织加入1ml TRIpure,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIpure 1ml混匀。注意:样品体积一般不要超过TRIpure体积的10%
     
    C:单层培养细胞:尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml TRIpure覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIpure量(每10cm21ml)。当TRIpure量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出全部RNA,继续做即可
     
    d细胞悬液:离心收集细胞。TRIpure试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的TRIpure。在加入TRIpure前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
    1. 将匀浆样品剧烈震荡后室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解
    2. 可选步骤 4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟,取上清。
    如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA上清中含有RNA处理脂肪组织的样品上层是大量油脂应除取澄清的匀浆液进行下一步
    1. 1ml TRIpure0.2ml氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温放置2~3分钟。
    5)4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层:下层红色有机苯酚氯仿层,中间层,上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIpure 容量的50-60%。 (有机层和中间层是蛋白和DNA,如果需要提取,请联系我们索取提取方法)。
    6)将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟
    RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀
    1. 室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟,弃上清
    2. 加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1mlTRIpure用1ml75%乙醇对沉淀进行洗涤。
    9)室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟,弃上清注意不要丢失RNA沉淀。
    注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
    10)室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μl RNase free water,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
    注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。
    Trizol(总RNA提取试剂)
    储存事项:
    TRIpure在室温下能稳定保存12个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在2~8°C的环境下。
    注意事项:
    1样品用TRIpure匀浆后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成cDNANorthern Blot等。
    2若下游实验对DNA非常敏感,建议用 RNase free DNase IRNA进行处理。
    3自备试剂:氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇(DEPC处理过的水配制)RNase free water或者DEPC处理过的水。
    4本公司生产TRIpure Reagent质量优异,可以完美替代InvitrogenTrizol Reagent。提取质量和下游实验完全一样。

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    • 组织和细胞总RNA提取TRIzol法)

      TRIzol RNA 提取 试剂 盒是由 GIBCO BRL 公司推出专供提取 RNA 的产品,其操作方便、快捷。 (一) 试剂 准备 1 . TRIzol 试剂。 2 .氯仿 3 .异丙醇 4 . 75% 乙醇( DEPC H 2 O 配制) 5 . DEPC H 2 O

    • 引用TRIzol RNA提取步骤系列问题

      有降解。 常见问题 一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2.如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,然后匀浆。

    • Real-time PCR实验攻略

      要勤换。 6. 设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用。 动植物总RNA提取-TrizolTrizol法适用于人类. 动物. 植物. 微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。 RNA可直接用于Northern斑点分析,斑点杂交, Poly(A)+分离,体外翻译,RNase封阻分析和分子克隆。 在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80

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