TriQuick Reagent总RNA提取试剂

TriQuick Reagent总RNA提取试剂

别名 : TriQuick Reagent总RNA提取试剂 Trizol
英文名称 : Triquick Reagent (Trizol Substitute)
储存条件 : 4℃避光保存，保质期12个月
外观（性状） : 液体
单位 : 盒
产品简介： 
本试剂是一种通用的总RNA提取试剂，适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提，可有效防止RNA在提取过程中的降解。获得的RNA可直接用于Northern杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase保护实验，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。该试剂可用于100次总RNA提取（10平方厘米细胞或100mg组织）。
操作说明: 
自备新开封或专用氯仿，异丙醇，75%乙醇，DEPC处理水。 
1. 细胞裂解或组织匀浆： 
1)贴壁细胞：吸尽培养液，每10平方厘米（6孔板孔或35 mm平皿）细胞加入1 ml TriQuick Reagent,使其覆盖培养细胞，再用吸管或加样器吹打2~3次，细胞应完全裂解，然后转移至离心管中。 
2)悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万（5×106-1×107）动植物或酵母细胞，或一千万 (1×107)细菌，加入1ml TriQuick Reagent 。用吸管或加样器吹打，使其完全裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，以确保其完全裂解。转移至离心管中。 
3)组织：先将组织剪切成小块，放入玻璃匀浆器内。冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。每50-100mg组织加入1ml TriQuick Reagent ，匀浆至完全裂解。转移至离心管中。 
裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。室温放置5分钟。对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品，匀浆后仍会存留有不溶物质，可12000g 4℃离心10分钟，然后吸取上清至一新的离心管中。 
2. 分离：在装有裂解物的离心管中加入0.2倍体积的氯仿（1 ml TriQuick Reagent 加入0.2 ml氯仿），振荡器上充分振荡混匀30秒，室温放置2-3分钟。12000g 4℃离心10分钟，然后吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中，每毫升TriQuick Reagent 约可吸取0.5-0.6 ml。有机相和中间层含有DNA和蛋白质，应避免触及。 
3. 沉淀：按每毫升TriQuick Reagent 加入0.5 ml异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。12000g 4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀。弃上清，按每毫升TriQuick Reagent 加入1 ml 75%乙醇，轻轻颠倒混匀，以清洗RNA沉淀。12000g 4℃离心2分钟，弃去液体，小心勿丢弃RNA沉淀。室温倒置晾干5~10分钟。 
4. 溶解：加入适量DEPC处理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。
注意事项：
1，RNA提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无RNA酶。操作中应小心，防止外源性RNA酶污染样品导致RNA样品降解。 2，试剂中含有酚等有害物质，注意个人防护。