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- 2026年01月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
一：背景介绍
四、病毒载体构建时间表
病毒载体构建时间表
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项目
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步骤
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时间
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前期准备工作
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实验方案设计
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1-3工作日
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原始质粒鉴定
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载体构建
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引物设计及
引物合成
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3-6工作日
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PCR，回收，纯化
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1工作日
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酶切，回收，纯化
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1工作日
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连接，转化
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1工作日
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提质粒，酶切鉴定
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2-3工作日
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测序
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3-5工作日
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总计
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11-18工作日
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病毒载体构建
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连接及转化
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1工作日
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提质粒，酶切鉴定
|
2-3工作日
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测序
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3-5工作日
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总计
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6-10工作日
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病毒包装、扩增
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细胞准备
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1-2工作日
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质粒线性化及转染
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1工作日
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包装
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12-15天
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扩增
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3-4天
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大规模扩增
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5-10天左右
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总计
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22-32工作日
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总计
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40-63工作日
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文献和实验）。 基因工程小鼠对生物医药研究发挥了巨大的作用，但也存在不少的限制因素： （1）从受精卵开始的基因干预，经过长时间发育的复杂代偿，所表现出来的功能表型和实际的基因功能表型可能存在巨大的偏差。2015 年 8 月份，nature 杂志发表了 Didier Stainier 研究小组发现受精卵敲除 egfl7 基因和成年后用 RNA 干扰阻断 egfl7 的表达，模式生物所得到的表型完全不一样。 （2）基因工程小鼠周期长，成本高。君忆否，动物房里伺候老鼠，一把屎一把尿拉扯
siRNA转染试剂进行预转染实验，优化转染效率，通过荧光定量RT-PCR或者Western-blot验证干扰效率。 服务流程 1)培养细胞 2)优化转染条件：在荧光显微镜下观察转染效率或者用流式细胞检测评估转染效率。 3)根据靶基因序列设计一组RNA干扰序列。 4)采用荧光定量PCR 或Western blot评估RNA干扰效率。 5)(可选)用相应抗生素筛选稳定表达shRNA或miRNA的细胞株。 客户提供
利用RNAi的威力RNA干扰（RNA interference RNAi）正在迅速成为最受欢迎的阻断特异基因表达的技术。RNAi技术允许科学家关闭他们想要研究的基因，这是一种全新的令人激动的研究方法，通过研究基因表达缺失时细胞的表型，以确定基因的功能。最初，通过在无脊椎动物如：果蝇（Drosophila）和线虫（C. elegans）导入长的双链RNA，揭示了RNAi是一种降低特异基因表达的强有力的方法（综述1，2）。现在可以使用修饰的RNAi阻断技术，在真核细胞中进行分析。BLOCK
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