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染色质免疫沉淀CHIP实验服务
- 提供商:
晶莱生物
- 规格:
实验服务
胞内DNA与蛋白质相互作用:CHIP
实验意义
染色体免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是研究体内DNA与蛋白质相互作用的技术,用于阐明真核生物基因表达机制的基本途径,CHIP可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以研究组蛋白的各种共价修饰和基因表达之间的关系,在基友表达调控研究中发挥着重要的作用。CHIP是表观遗传信息研究的主要方法,是深入分析恶性肿瘤、癌症、心血管疾病以及神经退行性疾病等病理诊断和基础与临床研究的有效工具。
实验原理
染色体免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)分析的是细胞内生理状态下DNA结合蛋白与基因组DNA相互作用的技术,也称作结合位点分析法,通常用于转录因子结合位点或者组蛋白特异性修饰位点的研究。基本原理是在活细胞的状态固定DNA-蛋白质复合物,然后通过免疫学的方法沉淀复合物,特异性地富集纯化后,对其进行检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。后续的分析检测可以通过定量PCR、Western Blot、CHIP-Seq、CHIP-chip(微阵列芯片分析)。
实验流程
1、甲醇固定细胞;
2、超声破碎;
3、目的蛋白的抗体孵育;
4、加入Protein A,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,沉淀;
5、洗脱后得到富集的靶蛋白-DNA复合物;
6、分离富集的DNA和蛋白质;
7、分析检测。
1、甲醇固定细胞;
2、超声破碎;
3、目的蛋白的抗体孵育;
4、加入Protein A,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,沉淀;
5、洗脱后得到富集的靶蛋白-DNA复合物;
6、分离富集的DNA和蛋白质;
7、分析检测。
结果展示
实验完成周期及交付标准
实验周期:1-3个月
交付标准:CHIP鉴定结果报告、分析报告、实验报告(试剂、耗材、实验步骤)、原始数据等
实验需与客户确认的信息
1、 目的基因与蛋白信息。
2 、样本类型与种属
3、 是否提供抗体
参考文献
[1] Orlando D , Chen M , Brown V , et al. Quantitative ChIP-Seq Normalization Reveals Global Modulation of the Epigenome[J]. Cell Reports, 2014, 9(3):1163-1170.
[2] Kohzaki H , Asano M . Chromosome and genetic testing using ChIP assay[J]. Frontiers in Bioscience, 2016, 8(2):298.
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文献和实验该产品被引用文献
[1] Orlando D , Chen M , Brown V , et al. Quantitative ChIP-Seq Normalization Reveals Global Modulation of the Epigenome[J]. Cell Reports, 2014, 9(3):1163-1170.
[2] Kohzaki H , Asano M . Chromosome and genetic testing using ChIP assay[J]. Frontiers in Bioscience, 2016, 8(2):298.
相关实验
抗体基础实验学习视频系列之三染色质免疫共沉淀实验(CHIP)视频教程,详细演示从裂解液制备到 DNA 定量的全过程。
单杂交系统等。但这些方法都有一定的局限性,不能充分反映生理情况下DNA与蛋白相互作用的真实情况,而且很难捕捉到在染色质水平上基因表达调控的动态瞬时事件。染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。特别是近年来由于该技术不断的发展和完善,其应用范围已经从研究目的蛋白与已知靶序列间的相互作用,发展到研究目的蛋白与整个基因组的未知
来达到去除非特异性吸附的效果。例如,针对单纯的免疫沉淀而非免疫共沉淀实验或者虽然是进行免疫共沉淀实验,但蛋白质之间的结合比较牢靠,可以考虑使用低浓度(0.2-0.5%)的SDS洗涤抗体-agarose beads复合物,这样可以去除绝大部分非特异性相互作用。四、 鉴定 免疫沉淀实验用途非常广泛(见IP: Q&A),而且基于最基本的免疫沉淀实验衍生出了许多免疫沉淀相关实验手段(比如免疫共沉淀,染色质免疫沉淀和RNA-蛋白免疫沉淀),因此,免疫沉淀实验的鉴定方法主要视实验目的而定。 由于免疫沉淀实验
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染色质免疫沉淀
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