TOP10F'感受态细胞

TOP10F’感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: TOP10F´ Ultracompetent cells；TOP10F'超级感受态细胞
菌种类型: E.coli
产品规格: 20X110 微升
转化效率: 〉1X10的9次方
基因型: TOP10F′感受态细

胞基因型
抗性: 四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
生长条件: 37 ℃, 有氧
用途: 克隆宿主菌，用于质粒扩增、筛选重组质粒。
菌株特点:
TOP10F´菌株含有F´附加体和lacIq，用于蓝白斑筛选时要向培养基中加入IPTG。

尤其适合TOPO克隆技术和零背景克隆技术，和扩增含Zeocin抗性的载体。

适用范围较广，在多种克隆手段中均可应用。

感受态制备方法: 采用最新的二价锰法，Ultracompetent cell 转化效率是常规氯化钙法的10倍。
TOP10F’感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
TOP10F’感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，TOP10F’感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。