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三年
lenti dCAS-VP64_Blast
20
泽叶生物
| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | lenti dCAS-VP64_Blast |
| 质粒类型: | CRISPR/Cas9载体；基因敲除载体;哺乳动物载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 克隆方法: | BsiWI，EcoRI |
| 启动子: | EF1 |
| 载体大小: | 14085 bp |
| 5' 测序引物及序列: | GTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAG |
| 3' 测序引物及序列: | cacatagcgtaaaaggagcaacatag |
| 载体标签: | -- |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素(Ampicilin) |
| 筛选标记: | Blasticidin |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 宿主细胞（系）: | 哺乳动物细胞 |
| 备注: | Mutation D10A and N863A in Cas9 |
| 产品目录号: | ZY61425 |
| 稳定性: | 稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 慢病毒 |
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文献和实验Lenti-Virus Protocol 张端午 A. For packing virus in 6-well plate: (if in 12-well plate, reduce all to 1/2) 1. Mix the following plasmids in a 1.5 ml eppendorf tube, 1.5 μg Lenti-vector + 1.5 μg packing plasmids = 3 μg total 0.5:0.3:0.2
性激活/抑制：通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点，Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白，dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上，在此基础上，研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件，如转录激活的VP64、VP16等，转录抑制的KRAB等，同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游，即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。dCas9技术原理3.外源过表达和内源激活的区别和选择4.基因干扰和基因敲除的的区别和选择
基因”)。 『Cas9 细胞系的构建』 dCas9-VP64 融合蛋白，需要细胞系预表达。该文献案例中，作者将 CRUK0748-XCL 细胞系改造为 CRUK0748-XCL-GLD 细胞，使其表达催化失活的 dCas9 与 VP64 融合的蛋白 (用于激活基因转录) 、GFP 和荧光素酶 (用于体内追踪)。 简单来说：使用了一种“没有剪切活性”的突变 Cas9 蛋白 (称为 dCas9) 。在 dCas9 上连了一些“转录激活因子” (如 VP64、p65、HSF1) 。当它被向导 RNA (sgRNA
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