| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pLKO-DEST-hygro |
| 质粒类型: | 慢病毒载体;RNAi载体;cDNA/shRNA gateway |
| 高拷贝/低拷贝: | 低拷贝 |
| 克隆方法: | gateway |
| 启动子: | U6 |
| 载体大小: | 9176 bp |
| 5' 测序引物及序列: | LKO.1 5':GACTATCATATGCTTACCGT |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | -- |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素、氯霉素 |
| 筛选标记: | Hygromycin |
| 克隆菌株: | 阳性筛选用DB3.1 ,阴性筛选用OmniMAX2-T1, 重组慢病毒载体的复制用Stbl3感受态细胞,以维持质粒的稳定性。 |
| 备注: | |
| 产品目录号: | #32685 |
| 稳定性: | 稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 慢病毒 |
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃低温保存
- 保质期:
三年
- 英文名:
pLKO-DEST-hygro
- 库存:
20
- 供应商:
泽叶生物
体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息

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文献和实验1.常用载体分类:2,常用载体元件介绍:(1) 启动子:启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。广谱启动子为在各种组织、细胞上广泛表达的启动子;特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。常用广谱启动子有CAG,CMV,EF1a,PGK等,还包含启动RNA的III型启动子U6和H1启动子;常用特异性启动子如成熟神经元特异性启动子hSyn,投射神经元特异性启动
polIII型启动子和终止子序列,RNAi靶序列克隆进入后将在哺乳动物细胞中形成shRNA。目的载体(destinationvector)Gateway®适合的目的载体(DEST)包含attR位点,可以与入门克隆进行重组,构建表达载体。BLOCK-iT™RNAi慢病毒和腺病毒DEST载体接受来自U6入门载体的RNAi框。此外,也有在原核、酵母、昆虫或者哺乳动物系统表达天然蛋白或者融合蛋白的DEST载体可供选择。LRClonase™便于attL和attR位点在LxRGateway®重组反应中进行重组的一种酶
用293FT细胞系和相关的ViraPower™ 试剂制备的高滴度的慢病毒储备液,进行有效的和可控制的导入。一旦制备好了慢病毒储备液,就可以转染细胞以观测RNAi反应(图9)。pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 慢病毒 RNAi 载体( pLenti6/BLOCK-iT™-DEST Lentiviral RNAi vector)提供能够长期观察稳定RNAi效应的能力。这个载体包含包装U6RNAi框到病毒所需的全部的元件,因而你能够转染shRNA到正在分裂、难于转染和不分裂的细胞中(图10
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