| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pDONR223, pDONR223 |
| 质粒类型: | Gateway系统的DONR载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 启动子: | -- |
| 克隆方法: | Gateway |
| 载体大小: | 5005bp |
| 5' 测序引物及序列: | M13-F(-20): GTAAAACGACGGCCAG |
| 3' 测序引物及序列: | M13-R: CAGGAAACAGCTATGAC |
| 载体抗性: | 壮观霉素、氯霉素 |
| 备注: | 载体本身含有CCDb致死基因，能够使得普通的DH5alpha等细菌死亡，必须 使用DB3.1感受态细胞进行质粒扩增，用来构建Gateway系统入门载体。 pDONR223尽管含有pUC质粒的起始复制点，但是细菌内仍然是低产量质粒。 构建Gateway系统入门克隆时需要使用ccdB敏感的 OmniMAX2感受态细胞。 |
| 产品目录号: | -- |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- ¥800
- ZYbscience
- 中国/美国
- ZY
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
pDONR223
- 库存：
20
- 供应商：
泽叶生物
载体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
载体序列
LOCUS pDONR223 5005bp DNA SYN
DEFINITION pDONR223
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biofeng.com/
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5005
/organism="pDONR223"
/mol_type="other DNA"
terminator complement(268..295)
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terminator complement(427..470)
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misc_feature 522..544
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promoter 537..553
/label="M13_forward20_primer"
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/label="attL1"
misc_feature 570..801
/label="attP"
misc_feature 656..768
/label="attR1"
misc_feature complement(668..768)
/label="attR2"
misc_feature complement(1197..1502)
/label="ccdB"
gene complement(1844..2503)
/label="CAT/CamR"
/gene="CAT/CamR"
CDS complement(1844..2503)
/label="ORF frame 1"
misc_feature complement(2751..2982)
/label="attP"
misc_feature complement(2784..2891)
/label="attR1"
misc_feature 2784..2884
/label="attR2"
misc_feature 2896..2983
/label="attL2"
promoter complement(3001..3019)
/label="T7_promoter"
promoter complement(3020..3038)
/label="M13_reverse_primer"
gene 3252..4262
/label="spect"
/gene="spect"
CDS 3252..4262
/label="ORF frame 3"
rep_origin 4339..4958
/label="pBR322_origin"
ORIGIN
1 CTTTCCTGCG TTATCCCCTG ATTCTGTGGA TAACCGTATT ACCGCCTTTG AGTGAGCTGA
61 TACCGCTCGC CGCAGCCGAA CGACCGAGCG CAGCGAGTCA GTGAGCGAGG AAGCGGAAGA
121 GCGCCCAATA CGCAAACCGC CTCTCCCCGC GCGTTGGCCG ATTCATTAAT GCAGCTGGCA
181 CGACAGGTTT CCCGACTGGA AAGCGGGCAG TGAGCGCAAC GCAATTAATA CGCGTACCGC
241 TAGCCAGGAA GAGTTTGTAG AAACGCAAAA AGGCCATCCG TCAGGATGGC CTTCTGCTTA
301 GTTTGATGCC TGGCAGTTTA TGGCGGGCGT CCTGCCCGCC ACCCTCCGGG CCGTTGCTTC
361 ACAACGTTCA AATCCGCTCC CGGCGGATTT GTCCTACTCA GGAGAGCGTT CACCGACAAA
421 CAACAGATAA AACGAAAGGC CCAGTCTTCC GACTGAGCCT TTCGTTTTAT TTGATGCCTG
481 GCAGTTCCCT ACTCTCGCGT TAACGCTAGC ATGGATGTTT TCCCAGTCAC GACGTTGTAA
541 AACGACGGCC AGTCTTAAGC TCGGGCCCCA AATAATGATT TTATTTTGAC TGATAGTGAC
601 CTGTTCGTTG CAACAAATTG ATGAGCAATG CTTTTTTATA ATGCCAACTT TGTACAAAAA
661 AGCTGAACGA GAAACGTAAA ATGATATAAA TATCAATATA TTAAATTAGA TTTTGCATAA
721 AAAACAGACT ACATAATACT GTAAAACACA ACATATCCAG TCACTATGAA TCAACTACTT
781 AGATGGTATT AGTGACCTGT AGTCGACCGA CAGCCTTCCA AATGTTCTTC GGGTGATGCT
841 GCCAACTTAG TCGACCGACA GCCTTCCAAA TGTTCTTCTC AAACGGAATC GTCGTATCCA
901 GCCTACTCGC TATTGTCCTC AATGCCGTAT TAAATCATAA AAAGAAATAA GAAAAAGAGG
961 TGCGAGCCTC TTTTTTGTGT GACAAAATAA AAACATCTAC CTATTCATAT ACGCTAGTGT
1021 CATAGTCCTG AAAATCATCT GCATCAAGAA CAATTTCACA ACTCTTATAC TTTTCTCTTA
1081 CAAGTCGTTC GGCTTCATCT GGATTTTCAG CCTCTATACT TACTAAACGT GATAAAGTTT
1141 CTGTAATTTC TACTGTATCG ACCTGCAGAC TGGCTGTGTA TAAGGGAGCC TGACATTTAT
1201 ATTCCCCAGA ACATCAGGTT AATGGCGTTT TTGATGTCAT TTTCGCGGTG GCTGAGATCA
1261 GCCACTTCTT CCCCGATAAC GGAGACCGGC ACACTGGCCA TATCGGTGGT CATCATGCGC
1321 CAGCTTTCAT CCCCGATATG CACCACCGGG TAAAGTTCAC GGGAGACTTT ATCTGACAGC
1381 AGACGTGCAC TGGCCAGGGG GATCACCATC CGTCGCCCGG GCGTGTCAAT AATATCACTC
1441 TGTACATCCA CAAACAGACG ATAACGGCTC TCTCTTTTAT AGGTGTAAAC CTTAAACTGC
1501 ATTTCACCAG TCCCTGTTCT CGTCAGCAAA AGAGCCGTTC ATTTCAATAA ACCGGGCGAC
1561 CTCAGCCATC CCTTCCTGAT TTTCCGCTTT CCAGCGTTCG GCACGCAGAC GACGGGCTTC
1621 ATTCTGCATG GTTGTGCTTA CCAGACCGGA GATATTGACA TCATATATGC CTTGAGCAAC
1681 TGATAGCTGT CGCTGTCAAC TGTCACTGTA ATACGCTGCT TCATAGCACA CCTCTTTTTG
1741 ACATACTTCG GGTATACATA TCAGTATATA TTCTTATACC GCAAAAATCA GCGCGCAAAT
1801 ACGCATACTG TTATCTGGCT TTTAGTAAGC CGGATCCACG CGATTACGCC CCGCCCTGCC
1861 ACTCATCGCA GTACTGTTGT AATTCATTAA GCATTCTGCC GACATGGAAG CCATCACAGA
1921 CGGCATGATG AACCTGAATC GCCAGCGGCA TCAGCACCTT GTCGCCTTGC GTATAATATT
1981 TGCCCATGGT GAAAACGGGG GCGAAGAAGT TGTCCATATT GGCCACGTTT AAATCAAAAC
2041 TGGTGAAACT CACCCAGGGA TTGGCTGAGA CGAAAAACAT ATTCTCAATA AACCCTTTAG
2101 GGAAATAGGC CAGGTTTTCA CCGTAACACG CCACATCTTG CGAATATATG TGTAGAAACT
2161 GCCGGAAATC GTCGTGGTAT TCACTCCAGA GCGATGAAAA CGTTTCAGTT TGCTCATGGA
2221 AAACGGTGTA ACAAGGGTGA ACACTATCCC ATATCACCAG CTCACCGTCT TTCATTGCCA
2281 TACGGAATTC CGGATGAGCA TTCATCAGGC GGGCAAGAAT GTGAATAAAG GCCGGATAAA
2341 ACTTGTGCTT ATTTTTCTTT ACGGTCTTTA AAAAGGCCGT AATATCCAGC TGAACGGTCT
2401 GGTTATAGGT ACATTGAGCA ACTGACTGAA ATGCCTCAAA ATGTTCTTTA CGATGCCATT
2461 GGGATATATC AACGGTGGTA TATCCAGTGA TTTTTTTCTC CATTTTAGCT TCCTTAGCTC
2521 CTGAAAATCT CGATAACTCA AAAAATACGC CCGGTAGTGA TCTTATTTCA TTATGGTGAA
2581 AGTTGGAACC TCTTACGTGC CGATCAACGT CTCATTTTCG CCAAAAGTTG GCCCAGGGCT
2641 TCCCGGTATC AACAGGGACA CCAGGATTTA TTTATTCTGC GAAGTGATCT TCCGTCACAG
2701 GTATTTATTC GGCGCAAAGT GCGTCGGGTG ATGCTGCCAA CTTAGTCGAC TACAGGTCAC
2761 TAATACCATC TAAGTAGTTG ATTCATAGTG ACTGGATATG TTGTGTTTTA CAGTATTATG
2821 TAGTCTGTTT TTTATGCAAA ATCTAATTTA ATATATTGAT ATTTATATCA TTTTACGTTT
2881 CTCGTTCAGC TTTCTTGTAC AAAGTTGGCA TTATAAGAAA GCATTGCTTA TCAATTTGTT
2941 GCAACGAACA GGTCACTATC AGTCAAAATA AAATCATTAT TTGCCATCCA GCTGATATCC
3001 CCTATAGTGA GTCGTATTAC ATGGTCATAG CTGTTTCCTG GCAGCTCTGG CCCGTGTCTC
3061 AAAATCTCTG ATGTTACATT GCACAAGATA AAAATATATC ATCATGCCTC CTCTAGACCA
3121 GCCAGGACAG AAATGCCTCG ACTTCGCTGC TGCCCAAGGT TGCCGGGTGA CGCACACCGT
3181 GGAAACGGAT GAAGGCACGA ACCCAGTGGA CATAAGCCTG TTCGGTTCGT AAGCTGTAAT
3241 GCAAGTAGCG TATGCGCTCA CGCAACTGGT CCAGAACCTT GACCGAACGC AGCGGTGGTA
3301 ACGGCGCAGT GGCGGTTTTC ATGGCTTGTT ATGACTGTTT TTTTGGGGTA CAGTCTATGC
3361 CTCGGGCATC CAAGCAGCAA GCGCGTTACG CCGTGGGTCG ATGTTTGATG TTATGGAGCA
3421 GCAACGATGT TACGCAGCAG GGCAGTCGCC CTAAAACAAA GTTAAACATC ATGAGGGAAG
3481 CGGTGATCGC CGAAGTATCG ACTCAACTAT CAGAGGTAGT TGGCGTCATC GAGCGCCATC
3541 TCGAACCGAC GTTGCTGGCC GTACATTTGT ACGGCTCCGC AGTGGATGGC GGCCTGAAGC
3601 CACACAGTGA TATTGATTTG CTGGTTACGG TGACCGTAAG GCTTGATGAA ACAACGCGGC
3661 GAGCTTTGAT CAACGACCTT TTGGAAACTT CGGCTTCCCC TGGAGAGAGC GAGATTCTCC
3721 GCGCTGTAGA AGTCACCATT GTTGTGCACG ACGACATCAT TCCGTGGCGT TATCCAGCTA
3781 AGCGCGAACT GCAATTTGGA GAATGGCAGC GCAATGACAT TCTTGCAGGT ATCTTCGAGC
3841 CAGCCACGAT CGACATTGAT CTGGCTATCT TGCTGACAAA AGCAAGAGAA CATAGCGTTG
3901 CCTTGGTAGG TCCAGCGGCG GAGGAACTCT TTGATCCGGT TCCTGAACAG GATCTATTTG
3961 AGGCGCTAAA TGAAACCTTA ACGCTATGGA ACTCGCCGCC CGACTGGGCT GGCGATGAGC
4021 GAAATGTAGT GCTTACGTTG TCCCGCATTT GGTACAGCGC AGTAACCGGC AAAATCGCGC
4081 CGAAGGATGT CGCTGCCGAC TGGGCAATGG AGCGCCTGCC GGCCCAGTAT CAGCCCGTCA
4141 TACTTGAAGC TAGACAGGCT TATCTTGGAC AAGAAGAAGA TCGCTTGGCC TCGCGCGCAG
4201 ATCAGTTGGA AGAATTTGTC CACTACGTGA AAGGCGAGAT CACCAAGGTA GTCGGCAAAT
4261 AACCCTCGAG CCACCCATGA CCAAAATCCC TTAACGTGAG TTACGCGTCG TTCCACTGAG
4321 CGTCAGACCC CGTAGAAAAG ATCAAAGGAT CTTCTTGAGA TCCTTTTTTT CTGCGCGTAA
4381 TCTGCTGCTT GCAAACAAAA AAACCACCGC TACCAGCGGT GGTTTGTTTG CCGGATCAAG
4441 AGCTACCAAC TCTTTTTCCG AAGGTAACTG GCTTCAGCAG AGCGCAGATA CCAAATACTG
4501 TCCTTCTAGT GTAGCCGTAG TTAGGCCACC ACTTCAAGAA CTCTGTAGCA CCGCCTACAT
4561 ACCTCGCTCT GCTAATCCTG TTACCAGTGG CTGCTGCCAG TGGCGATAAG TCGTGTCTTA
4621 CCGGGTTGGA CTCAAGACGA TAGTTACCGG ATAAGGCGCA GCGGTCGGGC TGAACGGGGG
4681 GTTCGTGCAC ACAGCCCAGC TTGGAGCGAA CGACCTACAC CGAACTGAGA TACCTACAGC
4741 GTGAGCATTG AGAAAGCGCC ACGCTTCCCG AAGGGAGAAA GGCGGACAGG TATCCGGTAA
4801 GCGGCAGGGT CGGAACAGGA GAGCGCACGA GGGAGCTTCC AGGGGGAAAC GCCTGGTATC
4861 TTTATAGTCC TGTCGGGTTT CGCCACCTCT GACTTGAGCG TCGATTTTTG TGATGCTCGT
4921 CAGGGGGGCG GAGCCTATGG AAAAACGCCA GCAACGCGGC CTTTTTACGG TTCCTGGCCT
4981 TTTGCTGGCC TTTTGCTCAC ATGTT
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文献和实验相关实验
用传统的限制酶切和连接的方法产生入门克隆。这些载体配合合适的目的载体，可以用于表达天然蛋白或带有N端或C端融合标签的重组蛋白。为了在真核细胞中有效地翻译蛋白，所有的5个Gateway入门载体提供了Kozak 序列。此外，pENTR11提供了SD （Shine-Dalgarno）序列，便于在大肠杆菌中有效的翻译。2、PCR重组克隆 重组是从PCR产物创建Gateway入门克隆的另一种方法。这种方法是通过合并attB位点到上游和下游引物上，然后共同孵育PCR扩增产物和pDONR载体（包含attP位点
是线性的，如果用质粒必须做酶切，但是事实证明用超螺旋的质粒结果没有区别。5. 同理，用引物在目的基因上下游加入AttL序列后直接进行LR反应也是可行的，可以省去BP反应相关的材料和费用。但是pDONR系列载体自有其优点（载体小，拷贝数高，卡那霉素抗性，容易测序），所以要按实际情况权衡6. 慢病毒载体的空白质粒有大量的重复序列，久存会导致LR反应成功但是转化后抽不出质粒的情况，需要注意。
3. 用SuperScript™ II逆转录酶合成第一链和第二链cDNA 4. 连接attB1接头 5. 加上接头的cDNA和pDONR™222载体混合在BP Clonase™酶存在时构建入门文库 6. 得到的入门克隆有attL位点；产生的副产物是自由的ccdB基因 7. 转化E.coli并选择抗卡那霉素的克隆
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pDONR223载体
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