| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 别名: | pTrc99a, pTrc 99a |
| 质粒类型: | 大肠杆菌蛋白表达载体 |
| 拷贝水平: | 高拷贝 |
| 启动子: | Trc |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 4176 bp |
| 5' 测序引物及序列: | RV-M: GAGCGGATAACAATTTCACACAGG |
| 3' 测序引物及序列: | pTrcHis-R: GATTTAATCTGTATCAGG |
| 载体标签: | none |
| 载体抗性: | 氨苄 |
| 备注: |
宿主菌: E.coli. 相关载体: pBR322, pTrc97.
|
| 产品目录号: | -- |
| 稳定性: | 瞬时表达 |
| 组成型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- ¥800
- ZYbscience
- 中国/美国
- ZY
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
pTrc99a
- 库存：
20
- 供应商：
泽叶生物
pTrc 99a载体基本信息
pTrc 99a载体质粒图谱和多克隆位点信息
pTrc 99a载体简介
细菌表达，可诱导蛋白表达，使用IPTG进行诱导（1 mM IPTG）。
pTrc 99a载体序列
LOCUS pTrc99A 4176 bp DNA circular SYN
DEFINITION pTrc99A
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biofeng.com/
COMMENT ORIGDB|GenBank
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
COMMENT VNTOAUTHORAD1|Novagen Inc.|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4176
/organism="pTrc99A"
/mol_type="other DNA"
promoter 193..266
/label="trc_promoter"
misc_feature 235..257
/label="M13_pUC_rev_primer"
misc_feature complement(359..376)
/label="pTrcHis_rev_primer"
misc_feature complement(359..376)
/label="pBAD_rev_primer"
terminator 409..566
/label="rrnB_terminator"
terminator 532..575
/label="rrnB_T1_terminator"
terminator 707..734
/label="rrnB_T2_terminator"
promoter 776..804
/label="AmpR_promoter"
gene 846..1706
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS 846..1706
/label="ORF frame 3"
rep_origin 1861..2480
/label="pBR322_origin"
misc_feature 2877..2899
/label="pGEX_3_primer"
misc_feature 3046..4137
/label="lacI"
CDS 3178..4137
/label="ORF frame 1"
ORIGIN
1 gtttgacagc ttatcatcga ctgcacggtg caccaatgct tctggcgtca ggcagccatc
61 ggaagctgtg gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca taattcgtgt cgctcaaggc
121 gcactcccgt tctggataat gttttttgcg ccgacatcat aacggttctg gcaaatattc
181 tgaaatgagc tgttgacaat taatcatccg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga
241 taacaatttc acacaggaaa cagaccatgg aattcgagct cggtacccgg ggatcctcta
301 gagtcgacct gcaggcatgc aagcttggct gttttggcgg atgagagaag attttcagcc
361 tgatacagat taaatcagaa cgcagaagcg gtctgataaa acagaatttg cctggcggca
421 gtagcgcggt ggtcccacct gaccccatgc cgaactcaga agtgaaacgc cgtagcgccg
481 atggtagtgt ggggtctccc catgcgagag tagggaactg ccaggcatca aataaaacga
541 aaggctcagt cgaaagactg ggcctttcgt tttatctgtt gtttgtcggt gaacgctctc
601 ctgagtagga caaatccgcc gggagcggat ttgaacgttg cgaagcaacg gcccggaggg
661 tggcgggcag gacgcccgcc ataaactgcc aggcatcaaa ttaagcagaa ggccatcctg
721 acggatggcc tttttgcgtt tctacaaact ctttttgttt atttttctaa atacattcaa
781 atatgtatcc gctcatgaga caataaccct gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga
841 agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc
901 ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg
961 gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc
1021 gccccgaaga acgttttcca atgatgagca cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat
1081 tatcccgtgt tgacgccggg caagagcaac tcggtcgccg catacactat tctcagaatg
1141 acttggttga gtactcacca gtcacagaaa agcatcttac ggatggcatg acagtaagag
1201 aattatgcag tgctgccata accatgagtg ataacactgc ggccaactta cttctgacaa
1261 cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt ttttgcacaa catgggggat catgtaactc
1321 gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca
1381 cgatgcctac agcaatggca acaacgttgc gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc
1441 tagcttcccg gcaacaatta atagactgga tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc
1501 tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg
1561 ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta
1621 tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag
1681 gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt cagaccaagt ttactcatat atactttaga
1741 ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc
1801 tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa
1861 agatcaaagg atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa
1921 aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc
1981 cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt
2041 agttaggcca ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc
2101 tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac
2161 gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca
2221 gcttggagcg aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg
2281 ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag
2341 gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt
2401 ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat
2461 ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc
2521 acatgttctt tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt
2581 gagctgatac cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag
2641 cggaagagcg cctgatgcgg tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca
2701 tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag tatacactcc
2761 gctatcgcta cgtgactggg tcatggctgc gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc
2821 gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg
2881 gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgaggc agcagatcaa
2941 ttcgcgcgcg aaggcgaagc ggcatgcatt tacgttgaca ccatcgaatg gtgcaaaacc
3001 tttcgcggta tggcatgata gcgcccggaa gagagtcaat tcagggtggt gaatgtgaaa
3061 ccagtaacgt tatacgatgt cgcagagtat gccggtgtct cttatcagac cgtttcccgc
3121 gtggtgaacc aggccagcca cgtttctgcg aaaacgcggg aaaaagtgga agcggcgatg
3181 gcggagctga attacattcc caaccgcgtg gcacaacaac tggcgggcaa acagtcgttg
3241 ctgattggcg ttgccacctc cagtctggcc ctgcacgcgc cgtcgcaaat tgtcgcggcg
3301 attaaatctc gcgccgatca actgggtgcc agcgtggtgg tgtcgatggt agaacgaagc
3361 ggcgtcgaag cctgtaaagc ggcggtgcac aatcttctcg cgcaacgcgt cagtgggctg
3421 atcattaact atccgctgga tgaccaggat gccattgctg tggaagctgc ctgcactaat
3481 gttccggcgt tatttcttga tgtctctgac cagacaccca tcaacagtat tattttctcc
3541 catgaagacg gtacgcgact gggcgtggag catctggtcg cattgggtca ccagcaaatc
3601 gcgctgttag cgggcccatt aagttctgtc tcggcgcgtc tgcgtctggc tggctggcat
3661 aaatatctca ctcgcaatca aattcagccg atagcggaac gggaaggcga ctggagtgcc
3721 atgtccggtt ttcaacaaac catgcaaatg ctgaatgagg gcatcgttcc cactgcgatg
3781 ctggttgcca acgatcagat ggcgctgggc gcaatgcgcg ccattaccga gtccgggctg
3841 cgcgttggtg cggatatctc ggtagtggga tacgacgata ccgaagacag ctcatgttat
3901 atcccgccgt caaccaccat caaacaggat tttcgcctgc tggggcaaac cagcgtggac
3961 cgcttgctgc aactctctca gggccaggcg gtgaagggca atcagctgtt gcccgtctca
4021 ctggtgaaaa gaaaaaccac cctggcgccc aatacgcaaa ccgcctctcc ccgcgcgttg
4081 gccgattcat taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg gcagtgagcg
4141 caacgcaatt aatgtgagtt agcgcgaatt gatctg
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文献和实验相关实验
大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用
双酶切后，嵌入表达载体pTrc-99B的NcoI和HindIII两个酶切位点间的切口内。得到的LeuRS 6个变种酶基因的正确性用DNA测序证实。 2. LeuRS及其变种酶基因的表达和纯化 1) 将含有LeuRS及其六个变种酶LeuRS-E292K，LeuRS-E292F，LeuRS-E292S，LeuRS-E292D，LeuRS-E292Q，LeuRS-E292A的基因的重组质粒转化到在大肠杆菌菌株TG1中，挑选含有正确质粒的转化子至5 mL氨节
6 pSport1 SP6/M13F(-47) T7/M13R pSUPER T7 T3 pTA2 M13F/T7(优先使用M13F） T3/M13R pT-Adv M13F /T7 M13R pTARGET TM pTarget.F(在T7前面）/T7 pTarget.R pTO-T7 T7 T7TER pTRC99a-c pTRC99C-F pTRC99C-R pTriPLEx2 5'pTriPLEx2 T7 pTWIN-1 T7 T7TER(客户确认再用） pUC18(19)/118
12 GC的含有93.7％完整AAV载体颗粒（通过EM测量）的制剂混合（图2）。 检测到代表空衣壳和完整衣壳的明显可区分的峰。 后来的洗脱峰含有> 99％的负载的全颗粒（通过qPCR测定）。 空衣壳的计算相对量（根据测量的峰面积）为34％（图2）。 然后使用AAV8衣壳的色谱分离来分析不同AAV制剂中的全粒子与空粒子比率。 基于色谱峰积分，通过CsCl梯度（通过EM测量的93.7％饱和度）对AAV制剂的定量导致空 - 满比率为0.016（1.6％空颗粒），而0.067（空颗粒为6.28
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pTrc99a载体
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