pRluc-N2载体

质粒测序正常，WB杂不出来，是什么原因？

liuruya 问别人要了个带GFP-tag（GFP-N2载体）的质粒，目的基因1.4kb，分子量约52kD，转染293T细胞能见荧光，WB杂不出来，设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag，仍然杂不出来WB。仔细检查过序列，不存在移码的问题，非常费解。有同学分析是空间位阻问题，不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么，或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢！！！ zhuqueleee

膜运输蛋白（membrane transport protein）

　　 也叫膜转运蛋白。能选择性地使非自由扩散的小分子物质透过质膜。 　　细胞膜是脂双分子层、蛋白质和少量糖组成的，就其化学本质而言，是半透膜。用人工脂膜测定证实，脂溶性分子和不带电的极性小分子易于通过质膜扩散，例如 O2 、 N2 、乙醇、尿素、甘油等；不带电的较大的极性分子如氨基酸、葡萄糖、蔗糖等难以透过；人工脂膜对带电的分子和离子是高度不通透的。水分子与脂不相溶，但作为不带电的双极小分子，它能迅速地通过质膜。 　　活细胞的情况与人工脂膜有所不同。绝大

【求助】小抽质粒浓度很低

lixingliang1987 本人最近小提质粒，挑取单克隆于3毫升LB培养基培养6小时候抽质粒，发现浓度只有50纳克每微升。 后来重新挑取单克隆于10毫升LB培养基培养14小时，收集10ml菌液进行离心，裂解，上柱（10ml菌液只上一个柱子，量绝对足够了吧），结果浓度才300纳克每微升，我本计划下步做转染，如此低得浓度我很是担心啊 不知道大家有没有遇到过此情况。我用的是pEGFP-N2质粒，是高拷贝的。 PS：我怀疑是不是抗生素失效导致