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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称:
原位分子杂交
- 提供商:
晶莱生物
- 规格:
实验服务

实验技术简介:通过各种方法将核酸分子固定在固相支持物上,然后用放射性标记的探针与被固定的分子杂交,经显影后显示出目的DNA或RNA分子所处的位置。
实验技术原理:利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的 外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的 位置显示出来。用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高,可以通过延长曝光时间加强信号强度,比较灵敏。
分类:显色原位杂交和荧光原位杂交
实验操作流程:
1、取材
2、固定
3、预杂交
4、杂交
5、洗涤
6、封闭
7、二抗
8、显色
实验注意事项:
客户提供:
1、组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存,组织不少于100mg;
2、培养细胞:通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-80℃,避免反复冻融);
3、血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-80℃可长期保存,避免反复冻融);
4、血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可长期保存,避免反复冻融);
5、样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后,加冰袋寄送;
细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出);
血清或上清液直接加冰袋寄送(送视路程远近2-3天可到达)。
交付标准:
1、图片
2、完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)
其他:
1、最常用多聚甲.醛固定组织,因其不会与蛋白质产生广泛的交叉连接,不会影响探针穿透入细胞或组织。
2、增强组织通透性常用的方法如应用稀释的酸洗涤、去垢剂(detergent)或称清洗剂Triton X100、酒精或某些消化酶如蛋白酶K,胃蛋白酶、胰蛋白酶、胶原蛋白酶和淀粉酶(diastase)等。
晶莱生物服务流程
收费标准/服务周期/提供结果:
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文献和实验原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带颜色的杂交信号,在显微镜或电子显微镜下进行细胞内定位。这一技术为研究单一细胞中DNA和编码各种蛋白质、多肽的相应mRNA的定位提供了手段,使从分子水平研究细胞内基因表达及有关基因调控提供
网络 第二节 原位分子杂交技术在电镜水平的应用 自Gall和Pardue建立了原位杂交技术以来近20余年内,这一技术为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病毒学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料,发挥了其它技术难以取代的作用。近年来,此一技术的应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方
,所以最为常用。常用的固相杂交类型有:菌落原位杂交、斑点杂交、狭缝杂交、Southern 印迹杂交、Northern 印迹杂交、组织原位杂交和夹心杂交等。固相膜核酸分子杂交1. 菌落原位杂交(Colony in situ hybridization)将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂菌以释出 DNA,再烘干固定 DNA 于膜上,与 32P 标记的探针杂交,放射自显影检测菌落杂交信号,并与平板上的菌落对位。2. 斑点杂交(Dot blotting)该方法是将被检标本点到膜上,烘烤
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