Shotgun文库构建

一. SMART cDNA 文库构建
以总RNA为模板，采用SMART方法将mRNA在体外反转录成cDNA，与适当质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这种包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆群体称为某组织或细胞的cDNA文库。美吉生物具有众多的SMART cDNA文库构建成功案例，可以构建不同材料来源的cDNA文库。

文库特点
1. 材料用量少：只需1 μg总RNA。
2. 全长比率高：采用Clontech SMART专利技术，全长比率一般在30%以上。
3. 实验周期短：最快2～3周即可完成整个文库构建。

提供结果
1. 产物电泳图谱
2. 文库连接液，保存于－20℃
3. 文库评价数据，包括库容量，插入片段平均长度，重组效率，cDNA完整性评价等
4. 实验报告

应用领域
1. 物种种质资源开发与保护
2. 物种遗传功能分析
3. 基因克隆与表达
4. 新基因的发现
5. 功能基因的筛选

二. 抑制性消减杂交 cDNA 文库技术（ SSH ）
抑制性消减杂交文库技术结合了抑制消减杂交、基因文库和斑点杂交等多种技术，能高效筛选出差异表达基因。与传统的DD-PCR、SAGE及cDNA-RDA等技术相比，具有低丰度mRNA富集率高、假阳性低、灵敏度高、重复性好等特点。该技术尤其适用于Genome尚不完全清晰的物种及某些特殊生物材料的研究。

服务项目
1. Clontech SSH文库（差异基因片段文库）
2. cDNA消减文库（差异基因cDNA文库）
3. SMART cDNA消减文库（差异基因全长cDNA文库）

技术特点
1. 只需要0.5～2 μg的mRNA或最低只需50ng的总RNA。
2. 可以在物种遗传信息未知的情况下，进行多样本差异基因高通量筛选，尤其适用于非模式生物（植物\昆虫\鱼类等）的研究。具有通量差异的基因以克隆形式得以保存，便于后续研究（测序、RACE、引物设计等）。

提供结果
1. SSH差减文库（PCR产物）
2. 逆向斑点杂交筛选到的差异表达基因的实物克隆及序列信息（如合作伙伴要求测序）
3. 实验报告：构建过程说明、图片、质控信息

三. 均一化 cDNA 文库构建
构建均一化cDNA文库，使文库中各表达基因所对应的cDNA拷贝数相等或接近，能有效克服基因转录水平上的巨大差异给文库筛选和分析带来的障碍，有利于研究基因的表达和序列分析。通过构建均一化文库，以获得更全面的基因信息，可以节省大量的测序费用，性价比高。美吉生物采用先进的cDNA文库均一化技术，能减少高丰度表达基因10～100倍，有效富集低丰度表达基因，从而大大降低了数据冗余率。

文库特点
1. 材料用量少，文库构建只需1μg总RNA。
2. 技术成熟，均一化程度高，无需反复杂交过程。
3. 均一化过程对插入片段大小无明显影响。
4. 均一化后，减低高丰度表达基因10～100倍。

提供结果
1. 文库连接液，保存在－20℃
2. 实验报告：文库评价数据（库容量，插入片段平均长度，重组效率，cDNA完整性评价， 冗余度评价）、实验流程、产物电泳图谱及均一化前后管家基因对比图

晶莱生物服务流程


晶莱生物实验服务项目

动物实验	细胞生物学	病理实验
消化系统模型	细胞培养	病理染色
胃酸分泌模型	普通细胞株	HE染色
脓毒症模型	细胞缺氧培养	油红O染色
胃溃疡模型	细胞培养+支架	番红固绿染色
胰腺炎模型	干细胞培养	Masson染色
肝纤维化模型	原代细胞分离/提取/培养	天狼猩红染色
DIO肥胖模型	细胞转染/病毒感染	PAS糖原染色
胆结石模型	Trans well共培养	阿利新蓝染色
结肠炎(UC)模型	细胞增殖	甲苯胺蓝染色
脂肪肝模型	细胞计数	尼氏染色
急性肝损伤模型	生长曲线测定	LFB髓鞘染色
免疫、代谢系统疾病模型	存活曲线测定	普鲁士蓝染色
骨质疏松模型	ccK-8增殖检测	VG染色
糖尿病模型	MTT增殖检测	EVG染色
高尿酸血症模型	CFSE检测增殖-流式检测	VonKossa染色
呼吸系统模型	BrDU检测-免疫荧光法	刚果红染色
肺纤维化模型	细胞凋亡	苏丹黑B染色
慢性肺阻塞模型	Annexin V/PI流式检测细胞凋亡	Trap染色
急性肺损伤模型	WB检测凋亡相关蛋白	抗酸染色
哮喘模型	透射电镜观察凋亡小体	革兰氏染色
肺栓塞模型	Tunel染色(POD法,DAB显色)	AB-PAS染色
支气管炎模型	Tunel(荧光法,含试剂盒)	亚甲基蓝染色
泌尿生殖系统模型	DNA ladder法	苯胺蓝染色
慢性肾衰模型	细胞周期	荧光 DAPI染色
急性肾衰模型	细胞显微计数	普鲁士蓝染色
肾间质纤维化模型	PI染色	间苯二酚碱性品红染色
肾结石模型	BrdU渗入法	银染
肾炎模型	免疫荧光染色	黑色素染色
子宫内膜异位症模型	PI流式检测细胞周期	镀银染色
心血管系统模型	细胞运动	PASM 六胺银染色
冠心病模型	Transwell检测细胞迁移	VG染色
心肌梗死模型	Transwell检测细胞侵袭	富尔根染色
心脏骤停模型	细胞划痕	亚甲基蓝染色
慢性心力衰竭模型	细胞克隆	碘-碘化钾染色
动脉粥样硬化模型	集落形成法/稀释铺板方法	Goldner三色法染色
白血病模型	软琼脂克隆法	PAS-萘酚磺S染色
高血压模型	毛细管克隆法	改良苯酚品红染色
神经系统模型	体外实验血管生成	网状纤维染色
脑卒中模型	磁珠分选细胞	β-半乳糖苷酶染色
栓塞性脑梗死模型	流式分选细胞	镀银染色
脑出血模型	开机费	movat五色染色
脑损伤模型	单色	维多利亚蓝染色
脊髓损伤模型	双色	免疫组化
帕金森模型	CBA多细胞因子流式检测	免疫组化预式
老年痴呆模型	组织/血液细胞制备	免疫组化正式
应激模型	组织单细胞制备	免疫荧光（石蜡-单标）
骨骼疾病模型	中性粒细胞提取	免疫荧光（石蜡-双标）
骨折模型	其他样本细胞制备（如血液等）	免疫荧光（石蜡-三标）
骨缺损模型	外周血PBMC分离	免疫荧光（冰冻-单标）
风湿免疫性关节炎模型	线粒体组学	免疫荧光（冰冻-双标）
骨关节炎模型	线粒体膜电位检测-流式法	制片前处理
五官疾病模型	线粒体膜电位检测-免疫荧光法	石蜡组织包埋
眼科疾病模型	线粒体ROS生物含量检测--流式	特殊包埋（细胞、材料、眼球等）
鼻腔疾病模型	线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光	软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等）
皮肤疾病模型	线粒体通透性转换孔（mPTP）	骨组织脱钙（小）
皮肤损伤模型	溶酶体免疫荧光法	骨组织脱钙（大）
肿瘤疾病模型	线粒体+溶酶体共定位	骨组织EDTA脱钙（小）
原位瘤模型	内质网	骨组织EDTA脱钙（大）
转移瘤模型	线粒体钙瞬时变化检测-流式	石蜡白片
皮下植瘤模型	ATP检测	细胞爬片
	ADP检测
	AMP检测
流式	DNA/RNA半定量检测	基因编辑工具
组织细胞悬液处理	pcr检测mRNA	合成（3保1）片段/质粒/引物合成
细胞处理	microRNA检测	质粒载体构建
血液标本处理	LncRNA表达量的检测	过表达腺病毒载体构建包装
细胞刺激培养	CirRNA表达量的检测	shRNA腺病毒载体构建包装
单色检测	凝胶电泳	过表达慢病毒载体构建包装
双色检测	基因合成	shRNA慢病毒载体构建包装
Annexin V/PI凋亡	＜300	过表达腺相关病毒载体构建包装
细胞周期	300-1,500	shRNA腺病毒载体构建包装
	1500 - 5000	稳转细胞株
	>5000
	特殊序列
ELISA	WB	qPCR
组织匀浆处理	蛋白提取及定量一	RNA抽提
ELISA（不含试剂盒）48T/kit	WB检测一（10孔膜/指标）	mRNA引物设计及合成
ELISA（不含试剂盒）96T/kit	灰度值分析及作图一（10孔膜/指标）	miRNA引物设计及合成
ELISA（含国产试剂盒）48T/kit	蛋白提取及定量二	LncRNA引物设计及合成
ELISA（含国产试剂盒）96T/kit	WB检测二（15孔膜/指标）	CircRNA引物设计及合成
	灰度值分析及作图二（15孔膜/指标）	mRNA RT-qPCR
		miRNA RT-qPCR
		LncRNA RT-qPCR
		CircRNA RT-qPCR

收费标准/服务周期/提供结果：
欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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