Shotgun文库构建

一. SMART cDNA 文库构建
以总RNA为模板，采用SMART方法将mRNA在体外反转录成cDNA，与适当质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这种包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆群体称为某组织或细胞的cDNA文库。美吉生物具有众多的SMART cDNA文库构建成功案例，可以构建不同材料来源的cDNA文库。

文库特点
1. 材料用量少：只需1 μg总RNA。
2. 全长比率高：采用Clontech SMART专利技术，全长比率一般在30%以上。
3. 实验周期短：最快2～3周即可完成整个文库构建。

提供结果
1. 产物电泳图谱
2. 文库连接液，保存于－20℃
3. 文库评价数据，包括库容量，插入片段平均长度，重组效率，cDNA完整性评价等
4. 实验报告

应用领域
1. 物种种质资源开发与保护
2. 物种遗传功能分析
3. 基因克隆与表达
4. 新基因的发现
5. 功能基因的筛选

二. 抑制性消减杂交 cDNA 文库技术（ SSH ）
抑制性消减杂交文库技术结合了抑制消减杂交、基因文库和斑点杂交等多种技术，能高效筛选出差异表达基因。与传统的DD-PCR、SAGE及cDNA-RDA等技术相比，具有低丰度mRNA富集率高、假阳性低、灵敏度高、重复性好等特点。该技术尤其适用于Genome尚不完全清晰的物种及某些特殊生物材料的研究。

服务项目
1. Clontech SSH文库（差异基因片段文库）
2. cDNA消减文库（差异基因cDNA文库）
3. SMART cDNA消减文库（差异基因全长cDNA文库）

技术特点
1. 只需要0.5～2 μg的mRNA或最低只需50ng的总RNA。
2. 可以在物种遗传信息未知的情况下，进行多样本差异基因高通量筛选，尤其适用于非模式生物（植物\昆虫\鱼类等）的研究。具有通量差异的基因以克隆形式得以保存，便于后续研究（测序、RACE、引物设计等）。

提供结果
1. SSH差减文库（PCR产物）
2. 逆向斑点杂交筛选到的差异表达基因的实物克隆及序列信息（如合作伙伴要求测序）
3. 实验报告：构建过程说明、图片、质控信息

三. 均一化 cDNA 文库构建
构建均一化cDNA文库，使文库中各表达基因所对应的cDNA拷贝数相等或接近，能有效克服基因转录水平上的巨大差异给文库筛选和分析带来的障碍，有利于研究基因的表达和序列分析。通过构建均一化文库，以获得更全面的基因信息，可以节省大量的测序费用，性价比高。美吉生物采用先进的cDNA文库均一化技术，能减少高丰度表达基因10～100倍，有效富集低丰度表达基因，从而大大降低了数据冗余率。

文库特点
1. 材料用量少，文库构建只需1μg总RNA。
2. 技术成熟，均一化程度高，无需反复杂交过程。
3. 均一化过程对插入片段大小无明显影响。
4. 均一化后，减低高丰度表达基因10～100倍。

提供结果
1. 文库连接液，保存在－20℃
2. 实验报告：文库评价数据（库容量，插入片段平均长度，重组效率，cDNA完整性评价， 冗余度评价）、实验流程、产物电泳图谱及均一化前后管家基因对比图

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