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- 载体构建服务(报告基因载体,过表达载体,干扰载体)
- 上海
- 2026年01月14日
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- 服务名称：
载体/质粒构建服务(报告基因载体,过表达载体,干扰载体)
- 提供商：
上海英拜生物科技
载体构建服务(报告基因载体,过表达载体,干扰载体)
本公司提供报告基因载体,基因过表达载体,microRNA过表达载体, 干扰载体构建服务.实验流程如下：
1、目的片段PCR克隆
以动物、植物、微生物组织或细胞为实验材料，提取基因组DNA或RNA并反转录成cDNA为扩增模板。根据您的实验方案合成引物，从获得的DNA或cDNA模板中扩增基因、启动子、编码区等功能元件。也可以免费帮助客户设计实验方案、设计并合成引物进行基因扩增。扩增得到的基因片段或者各功能元件片段亚克隆至T载体并测序验证。
2、全基因合成目的片段
可根据客户需要全新设计、合成基因，并克隆到T载体上。
3、目的片段亚克隆至载体
根据载体构建的需要，设计并合成引物从含有目的片段的载体DNA上扩增得到目的片段并酶切。也可从出发载体上酶切、回收。将酶切的目的片段与相应酶切的目标载体连接（PGL3-Basci载体, pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体，psiCHECK-2载体，pCMV-Tag载体等），重组子测序验证。
4、实验结果
a）2~20ug的含目的基因的重组质粒一份
b）含上述质粒的大肠杆菌菌株一份（培养后可提取重组质粒）
c）基因序列100%正确的原始报告测序正本一份
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文献和实验报告基因载体 (1)报告基因 载体的特点：除了具有表达蛋白质所需要的结构外，理想的报告基因载体本身无调节结合位点或序列，而具有有意插入的调节结合位点，尽管可以从报告基因载体除去已知的结合位点，减少报告基因上游的转录，但从几千kb的DNA中去除所有潜在的调控序列是不可能的。因此在使用报告基因载体时，应使用合适的对照载体。报告基因质粒载体一般在大肠杆菌中繁殖，因此包括一个DNA复制起始点(ori)和基因筛选标记，通常为氨苄西林抗性基因(Ampr)。另外还具有丝状噬菌体复制起始
janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数） woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
一 miRNA成熟及作用方式（Mikhailidis DP, Athyros VG. Nat Rev Cardiol. 2014 Feb;11(2):72-4.） miRNA过表达：将miRNA前体序列构建入病毒载体中，该载体既可用于瞬时转染细胞，也可以包装成病毒用于稳定株筛选和动物水平过表达miRNA。 miRNA敲低：设计针对miRNA的TuD RNA封闭片段或海绵片段，再将该片段构建入病毒载体中。该载体除了可以直接瞬时转染细胞用于miRNA的敲低，也可以包装成慢病毒，用于动物水平敲低miRNA
