质粒构建

质粒最早是20世纪50年代初期在大肠杆菌中发现的，是细菌、酵母菌、放线菌等生物中独立于染色体（或拟核）以外的闭合环状双链DNA分子，具有自主复制能力，可在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。

目前，质粒已成为基因工程中一种常用、简单的载体，具有自主复制、可扩增性、可转移性、不相容性等特点，除了在科研领域的普遍应用，质粒也被广泛用于多类生物医药产品的研发生产环节，如重组蛋白药物、疫苗、基因治疗药物以及CAR-T药物等。现在分子生物学使用的质粒载体都已不是原来细菌或细胞中天然存在的质粒，而是经过了人工的改造。从不同的实验目的出发，人们设计了各种不同的类型的质粒载体。

质粒构建的原理与类型：
由于实验室质粒的人造特性，它们也被称为“vectors”（载体）或“constructs”。为了将基因插入到载体中，科学家可以利用许多可选择的克隆方法（酶切连接法、Gateway、Golden Gate，Gibson等等）。克隆方法的选择取决于所用的质粒骨架，一旦克隆步骤完成，包含新插入基因的载体将被转化到细菌细胞中并且将转化菌液涂在含有抗生素的板子上进行选择。

外源 DNA 经 PCR 扩增后，用限制性内切酶分别切割载体和外源 DNA 片段，DNA 连接酶将二者进行连接，然后转入宿主细菌，通过筛选鉴定获得重组克隆。


质粒构建：
把目的核酸分子运送到受体细胞中去的一种载体，常用人工构建的质粒作为载体，进而研究基因的相关生物学功能。

 

实验步骤