- ¥1500
- XYbscience
- 中国/美国
- XY8205
- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 保质期：
三年
- 英文名：
pCS2FLAG
- 库存：
60
- 供应商：
信裕生物
基本信息
| 质粒类型: | 脊椎动物表达载体 |
|---|---|
| 载体大小: | 4151 bp (查看载体序列) |
| 载体抗性: | Ampicillin |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| XY8205 | pCS2FLAG | 5ug质粒 |
¥1500.00 |
质粒图谱
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文献和实验liuruya 问别人要了个带GFP-tag（GFP-N2载体）的质粒，目的基因1.4kb，分子量约52kD，转染293T细胞能见荧光，WB杂不出来，设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag，仍然杂不出来WB。仔细检查过序列，不存在移码的问题，非常费解。有同学分析是空间位阻问题，不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么，或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢！！！ zhuqueleee
GFP应该位于VEGF的C端 N端会干扰其分泌信号 影响其分泌 GFP很大 很可能影响VEGF的分泌 如果只是要筛带荧光的细胞 不需要标记VEGF 建议用pIRES2-EGFP非融合载体 要是需要标记的话 可以加小分子tag 比如flag 实在需要荧光标记VEGF的话 把GFP加在C端 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿
的核心。 --- 二、WB 验证的三个技术要点 1. 抗体怎么选 有目的基因特异性抗体 → 直接检测内源+外源总蛋白； 抗体不可得或背景差 → 载体设计时加 Flag/HA/Myc 等融合标签，用抗标签抗体检测； 注意区分：抗标签抗体检测的是"载体表达的蛋白"，基因特异性抗体检测的是"总蛋白（含内源）"，两者含义不同，报告时要写清楚。 2. 条带大小要核对 融合标签会改变蛋白分子量（如 3×Flag 约 +2.5 kDa，GFP 约 +27 kDa）。WB 条带必须与"内源蛋白 + 标签
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