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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻
- 保质期:
长期
- 英文名:
Zero TOPO-TA Cloning Kit
- 库存:
229
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
20T
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应零背景TOPO-TA克隆试剂盒厂商,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:零背景TOPO-TA克隆试剂盒厂商
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Zero TOPO-TA Cloning Kit
编号:SY0281
规格:20T
本试剂盒是利用拓扑异构酶(Topoisomerase)高效快速连接DNA*(代"片")段的原理进一步研发而成,与传统的T4连接酶相比,具有以下优势:
1)快速,仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2)高效,无自连现象,阳性克隆率接近100%,无需设置蓝白斑筛选;
3)操作简单,从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏等。
4)可连接长达10kb目的产物。
产品用途
A尾PCR产物的快速克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。
pESI-T vector (30ng/μl)——————20μl
1kb control insert(40ng/μl)——————5μl
10×Enhancer——————20μl
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
想要了解更多关于零背景TOPO-TA克隆试剂盒厂商的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销售下面的产品:
·绿色核酸染料(10000×水溶液)(同DuGreen、GelGreen)
编号:SY0245
英文名称:Green Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water)
规格:500μl
本产品是一种独特的油性大分子,不能穿透细胞膜进入细胞内,不易挥发升华,人体不会吸入。艾姆斯氏测试结果也表明本产品在凝胶染色浓度下完全没有诱变性,因此相对于EB的强致癌性是一种安全无毒的核酸染料。适用于各种大小片段核酸的电泳染色,对核酸迁移率的影响远小于SYBR Green I。适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶,室温下在酸或者碱性缓冲液中极其稳定,耐光性强。
本产品适用于琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dsDNA、ssDNA以及RNA染色,可以选择胶染法或泡染法进行染色,使用非常方便和灵活。同SYBR Green I的光谱性质,适用于使用254nm激发的紫外凝胶成像透射仪或可见光凝胶透射仪观察。
储存条件:4℃,避免强光直射,有效期12个月。
使用方法
一、胶染法(同EB,电泳前染色)
1 制胶时加入本产品核酸染料(每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL 本产品10000×水溶液,以此类推)。
2 按照常规方法进行电泳。
注意事项
1)此方法比较节省染料,500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。
2)由于本产品 具有良好的热稳定性,可以直接添加到热的琼脂糖溶液中而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将本产品储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。
3)本产品兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
4)如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。
5)胶染法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
二、泡染法(电泳后染色)
1)按照常规方法进行电泳。
2)用H2O将本产品 10000×水溶液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3×染色液。(如将15μL 本产品10,000×水溶液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
3)将凝胶小心地放入合适的容器中,缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10% 聚丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随聚丙烯酰胺含量增加而延长。
注意事项
1)用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
2)3×本产品染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。
零背景TOPO-TA克隆试剂盒厂商关键词:Zero TOPO-TA Cloning Kit,零背景TOPO-TA克隆试剂盒,SY0281
·DAPI染液(5mg/ml)
编号:SY0561
规格:1mg
本产品为溶液形式,浓度为5mg/ml。推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。DAPI,也称DAPI dihydrochloride,是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂,它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜,但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用来检测酵母线粒体DNA,叶绿体DNA,病毒DNA,microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
中文名称:4’,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐
英文名称:4’,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride
CAS:28718-90-3
分子式:C16H17Cl2N5
分子量:350.25
注意事项
1)DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
2) 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
3)为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:-20℃避光干燥,有效期一年。
零背景TOPO-TA克隆试剂盒厂商关键词:Zero TOPO-TA Cloning Kit,零背景TOPO-TA克隆试剂盒,SY0281
·C/EBPβ-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号:SY0121
英文名称:C/EBPβ luciferase reporter plasmid
规格:1μg
C/EBPβ-Luc荧光素酶报告基因质粒(C/EBPβ luciferase reporter plasmid)是用于检测C/EBPβ转录活性水平为目的的报告基因。C/EBPβ(CCAAT/enhancer-binding protein beta)是转录因子C/EBPs家族的重要成员,它主要通过对靶细胞基因转录的调节,参与细胞增殖与分化、肿瘤发生与凋亡、细胞周期调控等。
C/EBPβ-Luc荧光素酶报告基因质粒主要应用于C/EBP信号通路的研究、药物研究以及相关基因调控和功能的研究。
pGMC/EBPβ-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个C/EBPβ结合位点,可以高灵敏度地检测C/EBPβ的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得C/EBPβ报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱

使用说明
pGMC/EBPβ-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
储存条件:-20℃。
北京百莱博科技有限公司专业生产克隆与表达产品,欢迎来电咨询选购零背景TOPO-TA克隆试剂盒厂商。
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文献和实验Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法,但载体和Topo平端的一样,含ccdB基因,所以同样可降低菌落背景,易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method Product
和Topo平端的一样,含ccdB基因,所以同样可降低菌落背景,易于筛选。 表10 PCR 克隆 试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method
℃,而拓扑异构酶I则偏爱室温。这个室温是指22-23℃,应特别注意。很多时候我们实验室的室内温度并不满足条件。TOPO克隆得到的菌落可能不如TA克隆多,不过质量高,95%左右都是重组子。价格约为5748元/20次,时间就是金钱,这下体会到了吧。 如果你用的是高保真酶,你可以选择在PCR之后加A,或者你直接选择平端克隆试剂盒。由于载体会自连,所以平末端克隆的背景会很高。为了避免这个问题,Invitrogen开发了Zero Background(零背景)技术,用在TOPO载体上。这个技术
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