北京无缝克隆试剂盒厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京无缝克隆试剂盒厂商由老牌试剂供应北京百奥莱博供货并提供技术支持，本产品用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多无缝克隆试剂盒等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：北京无缝克隆试剂盒厂商
规格：25次
英文名：Seamless Cloning and Assembly Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
无缝克隆是一种简单、快速、高效的DNA 定向克隆技术，该技术突破传统，不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制，利用同源重组的原理，可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短，阳性率达95%以上。

产品特点：
1. 简单、高效地定向克隆DNA片段。
2.可同时定向克隆两个或多个DNA片段。
3. 不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制。
4. 省时，反应时间加转化时间短至20分钟。
5. PCR产物(仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体)可直接进行重组反应，无需纯化。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×Seamless Mix	125μl
阳性对照DNA片段I	10μl
阳性对照DNA片段II	10μl
阳性对照线性化载体	10μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 线性化载体的制备：
 可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。(如果线性化不彻底，将会导致阴性克隆的产生，推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。)
2. DNA片段的制备：
 1)DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备，PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。
 2)PCR扩增法引物设计原则：
  A.引物的3´端必须包含18-50个能与模板DNA 结合的碱基序列，以便PCR扩增出目的DNA片段。
  B.引物的5´端必须包含15-80个与线性化载体末端同源的碱基序列，以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。
3. 重组反应：
 1)按照如下体系操作：
 2)50℃反应15分钟，然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验，请将连接产物放-20℃保存。
 注：线性化载体建议使用20-60 ng，DNA片段按照与线性化载体摩尔比3：1使用。
4.转化：
 1)取5μl连接液至50-100μl 刚刚融化的感受态细胞中，轻轻混匀，冰浴2-30分钟。
 2)42℃水浴热激30秒。
 3)立即放置于冰上静置2分钟。
 4)加入300-500μl 无菌SOC或LB培养基(不含抗生素)，37℃，200-250rpm 振荡培养60分钟。
 5)吸取 200μl菌液涂板，为得到更多克隆，可先3000 g离心2分钟，弃掉部分上清，用移液器轻吹菌体，至充分悬浮，取全部菌液涂板，然后37℃培养过夜(12-16小时)。
5. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
6. 阳性对照反应(可选)
 将本试剂盒提供的阳性对照DNA片段和线性化载体按如下体系操作：
阳性对照DNA片段I(600bp，20 ng/μL)

或阳性对照DNA片段I(900bp，30ng/μL)

1μl
阳性对照线性化载体(2.8kb，30ng/μL)	1μl
2×Seamless Mix	5μl
超纯水	3μl

 50℃反应15分钟，然后按照步骤4转化涂板后用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定阳性重组子。

更多有关北京无缝克隆试剂盒厂商的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·MMLV逆转录酶(无RNase H活性)
编号：BTN131209
英文名称：MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)
规格：1000U
M-MLV逆转录酶(RNase H缺失)，是RNA依赖的DNA聚合酶，可用于长mRNA(＞5kb)为模板的cDNA合成。它是M-MLV 逆转录酶的一种类型，已经经过基因改造，去除了RNase H的活性。虽然许多研究者已经成功使用M-MLV RT(H+)进行了一些cDNA制备应用及分析，但是缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·PCR级海藻糖溶液
编号：BTN130506
英文名称：Trehalose Solution，PCR Grade
规格：1.5mL
本产品为浓度为5M的海藻糖的水溶液，可以直接添加到PCR反应体系或逆转录反应中提高酶的热稳定性和活性。

产品特点：
1.在反应体系中加入海藻糖，可以增加热敏感的酶在高温下的稳定性和活性。
2. 海藻糖能增加鼠白血病病毒逆转录酶(Reverse Transcripatase)的热稳定和热激活特性，使其在60℃仍具有全部活性，足以在mRNA二级结构诱导终止反应之前合成全长的cDNA，反应效率大大提高。
3. 有助于提高干燥保存的酶的活性。

储存条件：低温运输，4℃保存，保存期一年

使用方法：按照1/3体积，将本产品加入到PCR体系中即可。


北京无缝克隆试剂盒厂商关键词：无缝克隆试剂盒,Seamless Cloning and Assembly Kit,BTN160680

ARB10952 人肝细胞生长因子(HGF)elisa检测说明书 Human hepatocyte growth factor,hgf ELISA KIT
PY02-295  巧克力琼脂培养基基础  250克  
ARB10405 人可溶性细胞粘附分子(sICAM)酶联免疫定量检测 Human soluble intercellular adhesion molecule-1,sicam-1 ELISA KIT
甘油三丁酸酯 Leucomalachite Green 60-01-5
HC0324 Genex12道可调移液器
柠檬酸铁 D-Phenylglycine 3522-50-7
*丙*(代"酮")酸* 5′-UDP,2Na 114-76-1
盐*(代"酸")吡哆胺 Gly-Gly-Gly 524-36-7
ARB13677 兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)elisa检测说明书 Rabbit alpha-granular membrane protein,gmp-140 ELISA KIT
PY02-208  胰酪胨大豆羊血琼脂基础  250克  
547-50-8 Methyl Orange 甲基橙
F030104 HRP标记小鼠抗HIS标签抗体 Monoclonal Mouse Anti-His*HRP
SJ0698 低分子量蛋白Marker Ⅰ    (14.4-97.4kD)
F020215 兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG
BTN131151 山羊抗人IgG(H+L),辣根过氧化物酶标记 Goat Anti-Human IgG(H+L),HRP Conjugate
CD111 超纯dTTP(100mM)
SJ0686 200bp
ARB11923 人髓磷脂碱性蛋白(MBP-Ab)抗体Elisa方法检测 
北京无缝克隆试剂盒厂商关键词：无缝克隆试剂盒,Seamless Cloning and Assembly Kit,BTN160680


·柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN60807
英文名称：Endotoxin-free plasmid DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是整合我们公司柱式质粒DNA提取和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我们公司独家推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	13ml
溶液B	13ml
RNase A(10mg/mL)	150μl
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低温运输和保存。

使用方法：

一: 用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
1. 收集1.5-3mL E.coli饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1mL本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。
二：从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
1. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
2. 加入250μl溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。
3. 加入250μl溶液B(如果有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可。千万不要剧烈振荡。
4. 加入350μl溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上静止2-5分钟。注意：不要超过5分钟。
5.室温12000rpm离心10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6. 12000rpm离心1分钟，质粒DNA吸附到膜上，弃收集管中的废液。
7. 加入500μl的通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。注意：我们公司的通用洗柱液是由乙醇和含NaCl的溶液组成，NaCl在其中的溶解度较低，放置一段时间后可能会产生NaCl沉淀。如果有沉淀，用前最好加热使之溶解并混匀后使用。
8. 重复上步操作1次。
9. 12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA沉不到加样孔里去)和酶反应。
10. 将离心柱置于新的1.5mL离心管(自备)中，加入50μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。
11. 12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
12. 由于天我们公司的吸附柱结合DNA能力较强，需要再加入50μl DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，室温放置2分钟，重复上步操作，往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于第一次洗脱的20-30%)。注意不要使用上步得到的含有DNA的洗脱液来进行第二次洗脱。
13. 将两次洗脱收集到的质粒DNA汇集即可立即使用或放冰箱保存。

北京百莱博科技有限公司专业生产克隆与表达产品，欢迎来电咨询选购北京无缝克隆试剂盒厂商。