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TA克隆试剂盒Mighty TA-cloning Kit

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  • ¥825
  • Takara已认证
  • 6028
  • 2025年12月31日
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  • 企业认证

    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 规格

      20 Rxns

    ■ 制品内容 (20 次量)
    pMD20-T vector (50 ng/μl)1 μg (20 μl)
    Ligation Mighty Mix*150 μl × 2
    Positive Control Insert*210 μl
      
    *1: Ligation Mighty Mix与DNA Ligation Kit (Code No.: 6023) 是同一种试剂。
    *2: 3’端带有“A”突出端的DNA片段 (约200 bp)。 (以E.coli 基因组DNA为模板,使用TaKaRa Ex Taq 进行PCR反应得到的扩增产物。)(10 ng/μl)
     
    ■ 制品说明
    使用Taq DNA聚合酶进行PCR反应,扩增获得的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基。利用3’端附有“A” 碱基的PCR产物进行克隆时,与含有3’-T末端的载体通过T-A碱基互补配对原则进行克隆,此种方法被称为T-A克隆。
    Mighty TA-cloning Kit是在短时间内快速地将PCR产物进行T-A克隆的试剂盒。连接反应使用DNA Ligation Kit,操作简便,可在短时间内高效地进行连接反应。
     
    ■ 保存
    -20℃。
     
    ■ 使用注意事项
    1. Ligation Mighty Mix在冰上融解,轻轻混合后再使用。
    2. 长片段PCR产物(2 kb以上)进行DNA克隆时,连接反应时间请延长至数小时。
    3. 克隆时,根据插入片段的长度和方向,有时即使插入了DNA片段也会有不出现终止密码或读码框不改变的情况发生,在蓝白选择培养基上会形成淡蓝色菌落。出现这种现象时,建议进行菌落PCR确认插入片段。
    4. 进行切胶回收纯化DNA片段时要避免UV照射时间过长。长时间照射,DNA会受到损伤,影响克隆效率。
    5. PCR用质粒模板与克隆载体 (pMD20-T vector;具有Ampr) 有同样的选择标记基因时,为防止出现质粒模板自身的转化菌落,将PCR反应液凝胶电泳后回收目的片段,纯化后再进行克隆。

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    图标文献和实验
    相关实验
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    • TOPO TA Cloning

      on a gel and proceed immediately to the cloning reaction. 2.Prepare for the Transformation Reaction. a.Set water bath to 42℃. b.Warm SOC medium (Box 2) to room temperature. c.Warm pre-poured LB plates with 50 µg/ml ampicillin

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      at the end of the reaction to ensure that all products are full length and 3' adenylated. Check results on a gel and proceed immediately to the cloning reaction.2.Prepare for the Transformation Reaction.a.Set water bath to 42℃.b.Warm SOC medium (Box

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