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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格:
20 Rxns
| ■ 制品内容 (20 次量) | ||||||||||
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| ■ 制品说明 | ||||||||||
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| ■ 使用注意事项 | ||||||||||
| 1. Ligation Mighty Mix在冰上融解,轻轻混合后再使用。 2. 长片段PCR产物(2 kb以上)进行DNA克隆时,连接反应时间请延长至数小时。 3. 克隆时,根据插入片段的长度和方向,有时即使插入了DNA片段也会有不出现终止密码或读码框不改变的情况发生,在蓝白选择培养基上会形成淡蓝色菌落。出现这种现象时,建议进行菌落PCR确认插入片段。 4. 进行切胶回收纯化DNA片段时要避免UV照射时间过长。长时间照射,DNA会受到损伤,影响克隆效率。 5. PCR用质粒模板与克隆载体 (pMD20-T vector;具有Ampr) 有同样的选择标记基因时,为防止出现质粒模板自身的转化菌落,将PCR反应液凝胶电泳后回收目的片段,纯化后再进行克隆。 | ||||||||||
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文献和实验This protocol uses Promega''s pGEM-T kit (#A3600). PCR For TA cloning, it is optimal if the PCR primers have G''s at the 5'' end as this will maximize the probability of Taq polymerase adding the terminal A overhang
on a gel and proceed immediately to the cloning reaction. 2.Prepare for the Transformation Reaction. a.Set water bath to 42℃. b.Warm SOC medium (Box 2) to room temperature. c.Warm pre-poured LB plates with 50 µg/ml ampicillin
at the end of the reaction to ensure that all products are full length and 3' adenylated. Check results on a gel and proceed immediately to the cloning reaction.2.Prepare for the Transformation Reaction.a.Set water bath to 42℃.b.Warm SOC medium (Box
技术资料暂无技术资料 索取技术资料










