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赫澎(上海)生物
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赫澎(上海)生物科技有限公司打造公司++客户的模式,促使客户和效益共赢。 赫澎生物期待携手经销商,合作共赢。为科研事业增砖添瓦。
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订购赫澎生物产品,享受实验指导、实验开展指导、疑难问题解决。
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文献和实验【原创】新人马上要做western,贴出protocol和每日步骤,一为求大神指点解惑,二可与各位同仁相互交流
新的不能再新的菜鸟,没有师兄师姐带,也没有实验室老师带,完全自己摸索,到各个同学那里蹭经验。马上要做western,故将总结的western经验步骤po上来,一为求各位坛子里的大神垂怜,可以给予指导解惑,二来,也可与各位即将做western的新人一起交流心得,分享失败教训经验。若有不当之处,还请各位前辈、同仁给予指出,叩谢。 明日开始从提蛋白开始,今先po一部分步骤,明天晚上来汇报结果。 一、细胞总蛋白提取: 1、PIPA(碧云天)按100:1加入PMSF(碧云天),置于冰上备用
混匀,置于冰上 6.10min后,超声细胞仪打碎细胞,一般 7.4℃离心,13000rpm,5min 8.轻轻吸取上清液,置于新的EP管中,弃沉淀 二、标准曲线及蛋白浓度的测定(BCA法,适用于碧云天,参考说明书): 1.根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积试剂B(50:1)配置适量BCA工作液,充分混匀 2.将蛋白标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μl加入96孔板的标准品孔中,并加PBS补足至20μl 3.加适当体积样品到样品孔中,加PBS补足至20μl,另设空白
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直板型电泳)(图)
⑥1ml注射器及6号长针头 ⑦微量注射器(10μl或50μl) ⑧水泵或油泵 ⑨真空干燥器 ⑩培养皿(直径120mm) 2.试剂: (1)标准蛋白质 目前国内外均有厂商生产低分子量及高分子量标准蛋白质成套试剂盒,用于SDS-PAGE测定未知蛋白质分子量。 ①高分子量标准蛋白试剂盒(Pharmacia公司产品,表中16-1)。 表16-1 5种标准蛋白质 同时按说明书要求处理 ②
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