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蛋白含量(SP)试剂盒(BCA法),微板法

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  • ￥230
  • wksubio
  • WS8140W
  • 国内
  • 2025年11月04日
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    • 英文名：

      Protein Content (SP) Kit (BCA Method)

    • CAS号：

      WS8140W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书
    (货号：WS8140W 微板法 196 样)
    一、产品简介：
    BCA 蛋白含量试剂盒提供一种简单，快速，耐去污剂（最多 5％）的检测蛋白质浓度
    的方法。由于蛋白质能将Cu2+还原成Cu+；BCA可与Cu+结合生成紫蓝色复合物，在562nm
    处有最大光吸光值，颜色的深浅与蛋白含量成正比，因此可根据吸光值测定蛋白质浓度。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂 A
    液体 50mL×1 瓶
    4℃保存
    依据实验用量，临用前试剂
    A:B=50:1 的比例混匀成反应 mix
    试剂 B
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    标准品
    液体 1.5mL×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温水浴锅、移液器和蒸馏水。
    四、蛋白含量测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液（提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水）
    冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
    【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验前可以先选 2
    个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
    ② 细菌或细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
    超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），
    12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
    【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验前可以先选 2
    个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
    ③ 液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min，调节波长到 562 nm。
    ② 反应 mix 置于 60℃水浴预热 30 min（仅煮一次即可）。
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    空白管（只做一次）
    样本
    5
    蒸馏水
    5
    反应 mix
    200
    200
    混匀，于 60℃保温 30min，全部转移到 96 孔板，
    于 562nm 处测定吸光值 A，△A= A 测定-A 空白。
    【注】：若△A﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.188x - 0.0046；x 是标准品质量（
    μg），y 是△A。
    2、Cpr (mg/g 鲜重)=[(△A+0.0046)÷0.188×10-3]÷(V1÷V×W) ×D
    =1.06×(△A+0.0046) ÷W×D
    3、Cpr (mg/mL)=[(△A+0.0046)÷0.188×10-3]÷V1×D=1.06×(△A+0.0046)×D
    4、Cpr (μg/104 cell))=[(△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=2.13×(△A+0.0006)×D
    V---提取液体积：1mL；
    V1---加入粗提液体积：0.005mL；
    W---样本质量：g；
    D---稀释倍数，未稀释即为 1；
    500---细菌或细胞总数，万。
    附：标准曲线制作过程：
    1 标准品母液（500μg/mL）。
    2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,100, 200, 300, 400, 500. μg/mL。也可根据实
    际样本来调整标准品浓度。
    3 依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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    • 【资源】蛋白定量FAQS

      的测定，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的NaOH。Q3: 采用考马斯亮蓝蛋白定量法（Bradford法）测定蛋白含量，实验可能遇到的问题、原因及解决办法？问题：空白吸收好，但是标准品和样品数值比预期小原因：1.试剂储存不当；解决：试剂应冷藏2.试剂冷；解决：室温温育3.错误波长；解决：595nm测量问题：空白和标准品吸收好，但是样品数值比预期小原因：蛋白质分子量小于3000；解决：用BCA法问题：有沉淀形成原因：1.样品中有去污剂；解决：透析

    • 免疫组化经验总结

      组化技术。   2）ELISA 酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。   下面介绍下免疫组化方法的具体实验流程步骤。   实验流程简介   一、SP 三步法   1）石蜡切片，常规脱蜡至水。   2）0.3%或 3%H2O2 去离子水（无色液体）孵育 10-30 分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。  

    • 免疫组化技术——典型实验案例学习

      案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（Santa Cruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行，我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒，同时抗体稀释液也不够了，我又重新从博士德公司买了一小瓶10

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