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植物a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性比色法定量检测试剂盒

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  • ¥3300
  • 赫澎生物
  • 上海
  • HPBIO-JM5225
  • 2025年11月11日
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    • 保存条件

      干燥密封保存

    • 供应商

      赫澎(上海)生物

    • 规格

      20次

    淀粉酶(AMYLASE)属于糖苷水解酶类(glycoside hydrolase)。淀粉酶通过水解方式,分解淀粉的α-1,4链接,释放出葡萄糖、麦芽糖(maltose)、麦芽三糖(maltotriose)、糊精(dextrin)等简单糖分子。淀粉酶分成三类:α-淀粉酶、β-淀粉酶和γ-淀粉酶。其中α淀粉酶(EC 3.2.1.1)又称为α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(α-1,4-glucan 4-glucanohydrolase)或糖原酶(glycogenase,是钙离子依赖性钙金属蛋白酶(calcium metalloenzyme),分解淀粉为葡萄糖、麦芽糖(maltose)、麦芽三糖(maltotriose)、糊精(dextrin)等,为主要的消化酶,尤其在人体中,例如唾液和胰淀粉酶等。β淀粉酶(EC 3.2.1.2),又称为α-1,4-葡聚糖麦芽糖水解酶(1,4-α-D-glucan maltohydrolase)或糖基淀粉酶(saccharogen amylase),分解淀粉为葡萄糖等。植物、真菌、细菌等均能产生,而人体组织不含有。γ-淀粉酶(EC 3.2.1.2),又称为α-1,4-葡聚糖葡萄糖苷酶(Glucan 1,4-α-glucosidase)或溶酶体α-葡萄糖苷酶(lysosomal α-glucosidase),在酸性环境下分解淀粉为葡萄糖。淀粉是一种复杂分子,由多聚糖直链淀粉(amylose)和支链淀粉(amylopectin)构成。植物和细菌产生大多数淀粉。在淀粉酶的催化作用下,分解产生简单糖分子,作为能源储存,植物用于光合作用。植物和细菌性淀粉酶常用于工业,包括烘培食物和乳制品的,以及酒精和纸材的。基于淀粉,在中性环境下,通过α-淀粉酶的水解,释放出麦芽糖等含有游离的还原性基团(例如酮基等),进一步使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸(3,5-Dinitrosalicylic acidDNS)与之反应,产生红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸(3-amino-5-nitrosalicylic acid),在分光光度仪(540nm波长)下测定,以定量分析α-淀粉酶的活性。其反应方式为:

    产品内容

    HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
    HEPENGBIO裂解液(Reagent B) 毫升
    HEPENGBIO缓冲液(Reagent C) 毫升
    HEPENGBIO反应液(Reagent D) 毫升
    HEPENGBIO底物A(Reagent E) 毫升
    HEPENGBIO底物B(Reagent F 毫升
    HEPENGBIO补充液(Reagent G
    HEPENGBIO标准液(Reagent H
    产品说明书 1份

    保存方式

    保存在4冰箱里;HEPENGBIO底物液B(Reagent F),避免光照
    用户自备

    15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
    1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
    2.2毫升离心管:用于配制标准样品的容器
    DOUNCE匀浆器:用于裂解组织
    尼龙网(nylon mesh):用于去除残渣
    4℃(微型)台式离心机:用于样品处理
    沸水装置:用于反应物孵育
    比色皿:用于比色测定的容器
    分光光度仪:用于比色分析

    实验步骤

    一、样品准备
    1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定1克组织重量
    2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
    3. (选择步骤)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
    4. 移入到一个液氮冻存管
    5. 即刻放进液氮罐过夜
    6. 次日从液氮罐里取出,即刻(快速度)碾碎组织成粉末(注意:切莫使组织冻融
    7. 放进一个15毫升锥形离心管
    8. 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液(Reagent B)
    9. 涡旋震荡5秒,充分混匀
    10. 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
    11. 置于冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)
    12. 准备1个小型漏斗,内衬尼龙丝或150微米的尼龙网(nylon mesh),置于15毫升锥形离心管上
    13. 将所有组织匀浆物移入到小型漏斗里过滤
    14. (选择步骤)或者放进4台式离心机离心10分钟,速度为1000g
    15. 小心移取无渣液分装到预冷的1.5毫升离心管
    16. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-HEPENGBIO30030.1
    17. 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作(注意:后续操作须在2小时内完成)

    二、测定准备
    1. 从-70℃取出待测样品(例如植物组织裂解悬液样品等),置于冰槽里
    2. 设定好分光光度仪(温度为25℃):波长为540nm,并置零
    3. HEPENGBIO缓冲液(Reagent C)室温下均衡温度
    4. 测定开始前,移出xx微升HEPENGBIO底物BReagent F到新的1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO底物AReagent E,混匀后,置于冰槽里,标记为HEPENGBIO底物工作液(2次操作),放在暗室里备用。然后进行下列操作
      • 标准样品测定
    1. 准备好5个2.2毫升离心管,标记为15号管
    2. 分别加入xx毫升HEPENGBIO缓冲液(Reagent C)到1至5号管
    3. 移取xx毫升HEPENGBIO标准液(Reagent H到1号管,混匀
    4. 小心移取xx毫升1号管稀释的HEPENGBIO标准液(Reagent H到2号管,混匀
    5. 小心移取<

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