高尔基体（Golgi apparatus）形态红色荧光染色试

高尔基体（Golgi apparatus或Golgi body），又称为高尔基复合体（Golgi complex），是大多数真核细胞的细胞器组分，由40至100扁平片层或称为小池（cisternae）堆叠成内膜系统（endomembrane system），分成正侧或内侧网络（cis-Golgi network）、近内中间网络（medial-Golgi）、内腔网络（endo-Golgi）、外侧或反侧网络等（trans-Golgi）细胞内小管（tubules）、囊泡（vesicles）和小池（cisternae/sac）相互连接的网络结构，其主要功能在于由内侧网络接受内质网囊泡中的蛋白质和脂类等生物大分子，处理（修饰、分类）和组装后，由外侧网络转运分泌到目标位置。同时也是合成蛋白聚糖（proteoglycan）和碳水化合物的重要场所。高尔基体荧光探针N-7（4-基苯2-恶-1,3-重氮）6-氨基己酰鞘氨醇（N-[7-(4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole)]-6-aminocaproyl sphingosine；C6-NBD-Ceramide），是一种荧光NBD（N-7（4-基苯2-恶-1,3-重氮；N-[7-(4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole)]）标记的神经酰胺类似物（ceramide analog），选择性地结合高尔基体膜。它可以对活细胞进行直接染色，在激发波长466nm，散发波长536nm可以清晰看到被染成绿色的高尔基体细胞器。

产品内容

HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固着液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO预备液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent D） 微升
HEPENGBIO强化液（Reagent E） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存HEPENGBIO染色液（Reagent D）和HEPENGBIO强化液（Reagent E）在－20℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent D）避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；

用户自备

24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
微型台式离心机：用于沉淀细胞
4℃冰箱：用于染色孵育
培养箱：用于清洗孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后分别移出xx微升HEPENGBIO预备液（Reagent C）和2微升HEPENGBIO染色液（Reagent D）到新的1.5毫升离心管，标记为HEPENGBIO染色工作液，置于冰上，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

• 贴壁细胞标准染色

1. 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％

（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12）

1. 小心抽去细胞培养液
2. 小心沿着孔壁加入xx毫升4℃预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
3. 小心抽去清理液
4. 小心加入xx微升含有HEPENGBIO预备液（Reagent C）和HEPENGBIO染色液（Reagent D）的HEPENGBIO染色工作液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
5. 放进4℃冰箱里孵育30分钟
6. 小心抽去染色工作液
7. 小心沿着孔壁加入xx毫升4℃预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
8. 放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
9. 小心抽去清理液
10. 重复实验步骤8至10二次
11. 小心沿着孔壁加入xx微升4℃预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
12. 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长466nm，散发波长536nm（高尔基体呈现绿色）

• 悬浮细胞或脱离细胞染色

1. 将悬浮细胞或脱离细胞（1 X 10⁶细胞）移入到1.5毫升离心管
2. 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3. 小心抽去上清液
4. 加入xx微升4℃预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
5. 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6. 小心抽去上清液
7. 加入xx微升含有HEPENGBIO预备液（Reagent C）和HEPENGBIO染色液（Reagent D）的HEPENGBIO染色工作液，混匀细胞颗粒群
8. 放进4℃冰箱里孵育30分钟
9. 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
10. 小心抽去上清液
11. 加入xx微升