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- 2026年01月07日
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哺乳动物细胞表达系统
背景介绍
哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供很接近于天然状态的翻译后修饰，在蛋白表达过程中会形成接近天然蛋白的蛋白质折叠和聚合，具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰。由哺乳动物细胞翻译后再加工修饰产生的外源蛋白质，在活性方面远胜于原核表达系统及酵母、昆虫细胞等真核表达系统，更接近于天然蛋白质。这一特性使得哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白药物，特别是治疗性重组单抗药物的研发和生产中有很广泛的应用。安必奇建立了成熟的哺乳动物蛋白表达系统及纯化服务平台，提供哺乳动物蛋白表达系统的表达与纯化服务。
安必奇的哺乳动物细胞蛋白表达技术团队拥有丰富的CHO及HEK293细胞表达经验，同时可以提供标签切除、去除内毒素、无血清悬浮培养等多种特殊要求。为客户提供灵活优质的服务。
服务优势
·表达水平高：我们的载体可在哺乳动物细胞中高表达重组蛋白，表达量可高达1-3g/L。
·多种表达系统可供选择：瞬时表达、稳定细胞株表达、营养缺陷型细胞株表达(DHFR/GS)、大规模悬浮细胞表达等。
·大规模生产：我们的无血清悬浮细胞培养（HEK293和CHO）在一个月内可产生数克级蛋白。
·高成功率：在我们的哺乳动物表达系统中已经成功表达100多个蛋白。 
服务内容和流程
- 密码子优化，载体构建和目的基因的亚克隆
我们会根据CHO或者HEK293密码子的偏好性对目的序列进行密码子优化，并且针对于特定功能的motif、重复序列、GC含量以及mRNA的二级结构等综合考虑优化。安必奇拥有自主研发的表达载体，并且会在目的蛋白上添加分泌信号肽或标签，以促进目的蛋白的分泌表达易于纯化。 - 哺乳动物细胞转染，筛选稳定转染的细胞
我们采取瞬时转染表达的方法，短时间生产少量蛋白。同时我们也有构建稳定细胞系平台，使之长期稳定生产。瞬时转染一般在2-3周内可以表达少量的蛋白，稳定转染需要长时间的进行筛选，最终获得细胞株，稳定高表达目的蛋白，适用于大规模生产蛋白。安必奇会根据不同客户的不同需求，采取相应的表达方式。 - 重组蛋白表达评估
我们会先小量表达目的蛋白，对蛋白的表达量及蛋白性质进行评估。 - 蛋白纯化及鉴定
拥有先进的AKTA purifier系统和预装的离子柱、分子筛、疏水柱及亲和层析柱。 - 大规模蛋白表达和纯化（可选）
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文献和实验按照宿主细胞的类型，可将基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。与其它系统相比，哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能，因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。从最开始以裸露DNA直接转染哺乳动物细胞至今的30余年间，哺乳动物细胞表达系统不仅已成为多种基因工程药物的生产平台，在新基因的发现、蛋白质的结构和功能研究中
先前已经提到 Strep-tag® 的历史，现在我们将着重介绍 Strep-tag® 在哺乳类细胞表达系统的应用。虽然大肠杆菌 E.coli 表达系统经济实惠，但由于缺乏重要的脂类，分子螫合物，以及重要的翻译后修饰，用它表达真核蛋白，可能会影响蛋白本身的折叠及功能，以膜蛋白为例，大肠杆菌表达系统能影响目标蛋白在细胞膜的插入位置、及其应有的功能[1]。除此之外，当目标蛋白大于 50kDa 时，使用大肠杆菌系统可能表达出不完整的蛋白[2]。所以，为了研究特定蛋白的功能（如：信号通路）、生产较大
按照宿主细胞的类型，可将基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。与其它系统相比，哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能，因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。从最开始以裸露DNA直接转染哺乳动物细胞至今的30余年间，哺乳动物细胞表达系统不仅已成为多种基因工程药物的生产平台，在新基因的发现、蛋白质的结构和功能研究中亦起了极为重要的作用。本文主要从表达系统
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