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- 2026年01月06日
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酵母表达系统
酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点，培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便、成本低廉，蛋白翻译后能进行正确加工、修饰，合理的空间折叠，使得蛋白的可溶性大幅度提高，是最理想的重组真核蛋白生产制备工具。
安必奇具有丰富的酵母蛋白表达的经验，成功表达出超过100种重组蛋白。并且我们具有筛选酵母表达高拷贝菌株的服务，可以满足客户的多种特殊需求。我们利用酵母表达系统成功表达过具有二硫键蛋白及糖基化蛋白，使蛋白具有类似天然的结构和翻译后修饰，保证了蛋白的活性。
酵母系统表达的过程中，对诱导时间及温度的控制，对培养条件和菌株生长周期的把握直接影响到重组蛋白表达的成败，安必奇的技术人员拥有对整合流程精确的把握和控制，最大限度的提高表达的成功率及表达水平。
服务优势·高生产率：独特的分泌信号序列保证了重组蛋白的最大分泌量。
·两种表达体系可供选择：可选择组成性表达或者诱导表达两种体系。
·大规模生产：高达500L的生物反应器保证克级水平蛋白的生产。
·多种菌株和载体可供选择：我们提供包括X33, GS115, SMD1168等多种菌株和多种载体。
服务项目及流程
- 密码子优化
安必奇的密码子优化技术，涉及基因合成、载体构建、基因保证转录、mRNA翻译、翻译后修饰等环节。 - 重组酵母表达质粒构建、目的基因的亚克隆和重组质粒电转化进入表达菌株
- 鉴定筛选高表达菌株
通过PCR方法确定阳性转化株， SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。 - 蛋白表达分析鉴定。
- 蛋白表达条件的优化。
挑选阳性克隆进行常规表达筛选，并对其中表达最好的菌株优化表达条件。对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基，菌体密度，甲醇浓度，诱导时间等），提高目标蛋白的表达量。 - 大规模蛋白表达和纯化。
- 蛋白鉴定。
利用定性或者定量分析的方法进行蛋白质鉴定。
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文献和实验基因表达是分子生物学领域的重要内容之一，人们利用基因表达技术制备各种目的基因的重组蛋白质，在分析基因的表达与调控、基因的结构与功能、基因治疗以及生物制药等领域均取得了令人振奋的成果。其中，酵母表达系统拥有转录后加工修饰功能，操作简便，成本低廉，适合于稳定表达有功能的外源蛋白质，而且可大规模发酵，是最理想的重组真核蛋白质生产制备用工具。1、酵母表达系统的特点 酵母是一种单细胞低等真核生物，培养条件普通，生长繁殖速度迅速，能够耐受较高的流体静压，用于表达基因工程产品时，可以大规模生产，有效降低
、pPIC3.5、pPIC9等。 2.2 受体菌 在以葡萄糖或甘油为碳源的培养基上生长时，甲醇酵母中AOX 1基因的表达受到抑制，而在以甲醇为唯一碳源时，诱导基因表达，使外源蛋白质的产量更高。甲醇酵母适合高密度连续培养的条件，细胞干重达100g/L以上，蛋白质产量极高［14］ 。受体菌采用蛋白水解酶缺陷型，从而大大降低产物的降解。常用的甲醇酵母受体菌有GS115、KM71、PMAD11、PMAD16等。 3. 应用前景 经过近几年的发展完善，甲醇酵母表达系统已日趋成熟，应用
终止子（5'AOX1和3'AOX1），它们被多克隆位点（MCS）分开，外源基因可以在此插入。此载体还包含组氨醇脱氢酶基因（HIS4）选择标记及3'AOX1区。当整合型载体转化受体时，它的5'AOX1和3'AOX1能与染色体上的同源基因重组，从而使整个载体连同外源基因插入到受体染色体上，外源基因在5'AOX1启动子控制下表达。 与建立酿酒酵母基因工程表达系统类似，构建巴斯德毕赤酵母表达菌株的基本方法如下：(1)经典遗传学操作方法（如突变体分离、互补分析、回交和单孢分析）；(2)分子遗传学方法（如DNA
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