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PCR技术原理、实验步骤和应用
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PCR技术
PCR技术原理、实验步骤和应用由上海乔羽生物提供,仅供参考!PCR 技术,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍,这种迅速获取大量单 一核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义,极大地推动了生命科学的研究进展。关键词:PCRPCR聚合酶链反应一.锚定PCR(anchored PCR):引进锚定引物,可以帮助克服序列未知或序列未全知的障碍。在DNA3’-末端加上poly(dG)尾,与此相对应的锚定引物poly(dC)一般应在十二聚以上。二.不对称PCR(asymmetric PCR)不 对称PCR主要是在PCR体系中设计不同的引物浓度,两条引物浓度比为1:50或1:100,前12个循环两条模板等量扩增,之后低浓度引物消耗殆尽,其 扩增产物减少以至于无;而高浓度引物介导产生的扩增产物(即单链DNA)逐渐增加,可得到大量单链DNA(ssDNA)用于直接测序。三.反向PCR(inverse PCR)四.多重PCR(multiplex PCR)多重PCR是用多对引物同时对模板DNA上的多个区域进行扩增。多重PCR技术的难点不是在于其原理和操作的复杂性,而是在于其多对引物的设计,必需保证多对引物之间不形成引物二聚体,引物与目标模板区域具有高度特异性。应用于基因诊断,对与疾病相关的基因(庞大)进行扩增检测。五.逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)由mRNA逆转录产生cDNA链作为PCR反应模板。逆转录合成cDNA时,引物可选用特异引物、随机六聚体引物或寡聚dT(12-18)。设计RT-PCR的引物时最好是分散在不同的外显子上,以免基因组DNA的污染导致假阳性结果
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