增殖 (MTT/CCK8)

增殖 (MTT/CCK8) 细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。
细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8，MTT等方法。其中测定细胞生长曲线是检测细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后经过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。为了准确描述整个 过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。以存活细胞数(万／mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。我公司目前主要使用MTT和CCK8测定细胞生长曲线。

 
MTT检测
MTT检测以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT是一种黄颜色的染料，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比，从而可以对细胞的活力、增殖与凋亡情况进行检测。
 
CCK8检测
CCK-8的原理跟MTT是相同的，不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤，因此可以减少一定的误差，其重复性优于MTT；且对细胞毒性小

MTT与CCK8两种方法对比如下：

方法	MTT法	CCK-8法
产品	MTT	CCK-8（CK04）
检测对象	活细胞	活细胞
检测结果	细胞存活率	细胞存活率
用途	细胞增殖毒性	细胞增殖毒性
底物	MTT	WST®-8
底物作用对象	线粒体内脱氢酶	细胞内脱氢酶
检测方法	比色法	比色法
Formazan水溶性	不溶于水	溶于水
优点	成本低	重现性好
		灵敏度高
		操作简便
		试剂稳定性高
		对细胞毒性小
		Formazan溶于水
		适合高通量筛选
缺点	Formazan不溶于水，需用有机溶剂溶解	CCK-8试剂和酚红颜色接近，有时会有漏加或多加的情况
	对细胞有毒性
	操作繁琐，增加误差
	不适合悬浮细胞
	试剂需现配现用
产品性状	粉末	液体