噬菌体展示技术——高通量，有内涵

噬菌体展示技术是一种高效基因表达筛选技术，将外源蛋白或多肽与特定的噬菌体衣壳蛋白融合，展示在噬菌体表面并保持相对独立的空间构象和生物活性，有利于靶分子的特异性识别及结合，从而实现基因型和表达型的统一。

噬菌体展示技术因其独特的优势，现已广泛应用于抗原表位分析、单克隆抗体的制备、抗体人源化、药物筛选、疫苗研制以及免疫学疾病诊断、治疗等科学研究领域。

噬菌体技术为啥这么好用？为了一探究竟，我们先来弄清噬菌体是个啥？

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。噬菌体主要有双链噬菌体和单链丝状噬菌体两大类，双链噬菌体为λ类噬菌体，单链丝状噬菌体有M13、f1、fd噬菌体。

再聊聊噬菌体展示技术

噬菌体技术两大核心——建库和筛选

01噬菌体建库

从B淋巴细胞中扩增抗体的H链和L链基因文库，抗体片段群与噬菌体衣壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面，形成噬菌体展示抗体库。主要有三种类型： scFv库（由VH和VL组成，并由一个小肽（Gly4Ser）3连接成一个单链多肽）、Fab库（含有VH-CH，VL-CL，并由二硫键连接在一起）和VHH库（只有重链可变区）。

噬菌体展示肽库的构建途径：一是有机合成法，二是基因合成法。

噬菌体库的分类

随机肽库：

将化学合成的随机寡核苷酸序列与噬菌体的表面蛋白基因融合，在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的随机序列短肽。利用噬菌体展示随机肽库可以高通量筛选各种抗原的抗原表位。

天然库：

不用免疫动物。抗体均来源于人类，是完全的人源化抗体，但亲和力通常较低。骨髓内和骨髓外所有抗体基因都包含在内，所构建的抗体库适用于所有抗原所对应的抗体的选择，库容量要求较高，最小需要达到109，因为目前估算的自然界的抗原种类在这个数量级上。

免疫库：

免疫库由经过免疫后的供体B 淋巴细胞的抗体基因构建。与天然库相比，从免疫库中能筛选到高亲和力、高特异性的抗体。对于特定免疫抗原的抗体淘选的效率较高，但一般仅适用于一种特异性抗体的选择，库容量要求不高，一般106-108即可满足需求。

02噬菌体筛选

噬菌体抗体库的筛选是关键技术环节，包括两个主要步骤: 淘筛和鉴定。

噬菌体筛选方法

噬菌体筛选流程

>>>> 包被抗原及对照

>>>> bio-panning（3~4轮）

>>>> 多克隆ELISA判定特异富集 

>>>> 单克隆ELISA（普健可做高通量9undefinedn）

>>>> 阳性克隆validated ELISA  

>>>> 确认克隆测序 

>>>> 重组抗体表达 

噬菌体展示生物淘选流程

与传统获得抗体技术比较

普健生物可以提供

​1噬菌体展示抗体文库的构建(人源，兔源，鼠源，羊驼抗体库)

​2噬菌体展示多肽文库的构建

​3抗原表位筛选

​4抗体亲和力成熟

​5抗体人源化

服务特色

1. 建库：经验丰富，可构建多种类型的噬菌体免疫库和天然库（scFv、Fab、VHH等）。  

2. 筛选：普健自有噬菌体天然抗体文库，序列正确性高，来源丰富，库容大。

3. 筛选通量高，已成功交付多例建库及筛选项目，客户分布于欧洲及亚洲。 

4. 载体带有His标签，可直接用于表达抗体，方便抗体纯化验证。

5. 现已成功开发出兔scFv天然噬菌体文库产品：ATA-Rabbit Naïve ScFv I（库容：1.09×1010 pfu）。 

经兔scFv天然库筛选出的序列，拼接成全长IgG重组抗体表达纯化及功能验证