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- 2026年01月05日
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- 服务名称：
MSP甲基化检测服务
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卓立生物
原理：
甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重亚硫酸盐处理DNA后，基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的PCR。该方法引物设计是关键。MSP中设计两对引物，即一对结合处理后的甲基化DNA链（引物对M），另一对结合处理后的非甲基化DNA链（引物对U）。检测MSP扩增产物，如果用引物M能扩增出片段，则说明检测位点存在甲基化；若用引物U扩增出片段，则说明被检测的位点不存在甲基化。
该方法优点是：检测灵敏度高，样品消耗少，仅需1μg的基因组DNA，可用于石蜡包埋样本；快速、简单，省时。
MSP流程示意图
用亚硫酸盐处理后DNA分子发生了由甲基化状态决定的序列改变。用甲基化特异性的引物（primer M）和非甲基化特异性的引物（primer U）进行扩增。只有结合完全的甲基化或非甲基化特异性引物的片段才能得到扩增。
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文献和实验1. MSP原理：MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳，凝胶扫描观察分析结果。 此原理的关键在于3对特异引物的设计。引物序列设计在富含胞嘧啶区域以区别亚硫酸氢钠处理后转化的非甲基化的DNA与未转化的甲基化的DNA，在引物的3’端，至少含有3个CpG位点，以保证区别甲基化与非甲基化DNA
甲基化特异性 PCR(Methylmion Specific PCR，MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的经典方法．MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增，最后通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互 补的DNA序列的甲基化状态。MSP法灵敏度较高，应用范围广。MSP 实验流程： 抽提基因组DNA，并定量 （组织、细胞、全血、血浆/清等）亚硫酸
【求助】进行DNA甲基化MSP时，完全未甲基化的对照DNA怎么获得？
xiaoqin813 我打算做DNA甲基化的MSP，阳性对照（完全甲基化的DNA）可以通过SssI酶处理获得。但是阴性对照（完全未甲基化的DNA）大家一般是怎么获得的，现在有些公司卖这两种对照DNA。还有其他什么方法可以得到吗？谢谢大家指点。 waterbeijing whole genome amplification Does anyone hear of 5-hydroxymehtylation
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