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CRISPR/Cas9技术制备基因敲除小鼠
- 提供商:
上海南方模式生物科技股份有限公司
- 规格:
Cas9 KO/Cas9 CKO/Cas9 KI

技术原理 根据基因序列设计合成gRNA与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞质,Cas9核酸酶、gRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA,通过非同源性末端接合(NHEJ)修复途径或片段缺失造成靶基因的移码突变,从而实现基因敲除。NHEJ修复是随机的,可能在同一小鼠体内不同细胞造成的修复结果不同,敲除小鼠需要繁殖一代,获得稳定遗传的敲除杂合子小鼠。
服务周期 5-7个月
电话:400-728-0660 邮箱:info@shmo.com.cn
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文献和实验以最火热的 p53 为例Step1 先找 p53 基因序列1. NCBI--输入 p53 并选择物种 human:tumor protein p53 [Homo sapiens (human)]https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene2. Ctrl+F,输入 sequence,快速定位(当然其实拉下去就是了),点击 Genebank3. 下载 p53 基因序列4. 用 SnapGene 软件打开序列,并简单了解每个元件最好是可以学一下 SnapGene 这个软件的使用
设计了 sgRNA 之后怎么办呢?还是这篇文章先讲一下这里的框架首先是实验设计Experimental design1. Target selection for sgRNA--选择靶点详情见:CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计 https://www.jianshu.com/p/ 8222f449cb442. Approaches for sgRNA construction and delivery.sgRNA 的合成和投递有两种方式:A)PCR;B)单独的 sgRNA
CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
前期记录先确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- 目标基因背景调查设计 sgRNA 及引物CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后对前期文章的补充:设计 sgRNA 之后,需要对结果进行判断:但为什么 0.7044 分数的哪一个没有选,我也不知道为什么,总感觉他们的顺序不是随意的排的。或许有人能解答一下为什么。顺手把设计工具的解说放上
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