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基因敲除
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威斯腾生物
威斯腾生物技术中心成立以来,致力于为广大科研工作者提供强大的技术服务支持。经过多年探索和创新,我中心大力研发基因靶向操作技术,已走在世界前列。威斯腾生物技术中心已成功搭建基因敲除动物实验平台,能够成熟运用CRISPR/Cas9技术,在人、小鼠、猪等多物种的多个基因进行基因敲除、基因敲入和基因修复等基因编辑工作。中心背后有强大的Cas9专家指导团队支持,组建有全国的Cas9技术团队。我们围绕“专业之才,团队精英,技术过硬,服务第一”的服务宗旨,为广大科研工作者提供优质的技术服务和指导。
CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats),即成簇规律间隔的短回文重复序列。Cas9蛋白是一种能够降解DNA分子的核酸酶(nuclease),其中含有两个酶切活性位点,每一个位点负责切割DNA双螺旋中的一条链。CRISPR在大约40%的细菌和90%的古细菌(archaea)的基因组中均有存在,它依赖crRNA (CRISPR RNA能够与tracrRNA配对,形成双链RNA结构,这种双链RNA分子能够介导Cas9核酸内切酶对与双链RNA分子互补结合的DNA序列进行切割) 和tracrRNA (trans-activating chimeric RNA, 即反式激活嵌合RNA,一种非编码RNA,能够促进 crRNA的形成,是Cas9蛋白发挥RNA介导的DNA切割作用必不可少的辅助因子)对外源DNA进行特异的识别,然后使用Cas9对外源DNA进行序列特异性地切割降解,从在细菌和古细菌细胞发挥了一种获得性免疫的作用。CRISPR 本身是一种防御系统,用以保护细菌和古细菌细胞不受病毒的侵害。在这些生物基因组中的 CRISPR 位点能表达与入侵病毒基因组序列相匹配的小分子 RNA。当微生物感染了这些病毒中的一种,CRISPR RNA 就能通过互补序列结合病毒基因组,并表达 CRISPR 相关酶,也就是Cas,这些酶都是核酸酶,能切割病毒 DNA,阻止病毒完成其功能。
CRISPR/Cas9靶向基因改造(敲除、敲入)技术是最.新发展起来的一种强有力的用于基因组编辑(genome editing)的分子生物学工具,现已广泛应用于人、大鼠、小鼠、斑马鱼、果蝇、家蚕、线虫、酵母、拟南芥、烟草、高粱、水稻和小麦等各类动植物个体或细胞基因组的遗传学改造。
这种技术也易于操作,已经有两个研究组利用 CRISPR 分析了人类细胞中几乎每个基因单突变(详细报道 Science:CRISPR/Cas9加速基因挖掘;Science:张峰建立CRISPR/Cas9人细胞敲除体系)。就在最近,CRISPR 还帮助研究人员完成了携带特殊基因中断(gene disruptions)的工程猴,这项壮举此前曾在小鼠中实现过,但未在灵长类动物中完成过(详细报道 Cell:中国科学家利用CRISPR/Cas9技术构建基因工程猴)。
相较于TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)技术,CRISPR技术的效率要高得多,而且采用CRISPR技术可以一次性的对多个基因同时进行基因敲除和/或敲入。
服务项目
CRISPR /Cas9细胞建系技术服务
CRISPR /Cas9基因敲除细胞系
CRISPR /Cas9目的基因敲入细胞系
CRISPR /Cas9报告基因敲入细胞系
CRISPR /Cas9基因定点突变细胞系
CRISPR /Cas9 miRNA/ lncRNA 敲除细胞系
CRISPR /Cas9多基因敲除细胞系
CRISPR /Cas9基因敲除模型技术服务
CRISPR/Cas9基因敲除动物:大鼠 小鼠
CRISPR/Cas9条件性敲除小鼠
实验服务流程

威斯腾生物服务项目
| 分子生物学类 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀(Co-IP) | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA(酶联免疫吸附法)技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒类 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| 生长因子芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 信号通路磷酸化水平检测芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 生长因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 炎症因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因编辑动物 | |
| 趋化因子芯片 | 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 膜片钳实验 | |
| 细胞生物学 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理类 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片(限人和小鼠来源样本) |
| Tunel(原位末端凋亡法)检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片(限人和小鼠来源样本) |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研方案设计与SCI相关服务 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | SCI论文翻译润色服务 |
| 特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等) | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 水迷宫实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 神经系统药物药效学评价 |
| 旷场实验 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 分子药理研究平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 生物膜片钳药物筛选平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 常规药物体外筛选 | 抗炎免疫药物药效学评价 |
【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
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文献和实验TALEN和CRISPR/Cas9作为现代分子生物学技术上的一次革新,它结合了转基因技术简便快速,没有物种限制及ES细胞基因打靶技术精准的优点,在短短的几年时间里便受到广大科研人员的青睐。但由于其脱靶效应至今无法避免,且难以胜任大片段的基因敲入,所以还远远谈不上成熟。如何提高TALEN和CRISPR/Cas9的效率和降低脱靶效应将是未来的主要研究方向。基于同源重组的ES打靶是基因敲除的业内金标准,它通过同源重组技术将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造基因组某一基因的目的
动物模型是现代生命科学研究的重要工具,特别是基因工程小鼠和大鼠,在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来,制备动物模型的基因修饰技术层出不穷,这不仅包括传统 ES 打靶、TALEN、CRISPR/Cas9, 还有 TetraOneTM 基因敲除新技术。如此繁多的技术该如何选择?本文将对这四种技术的原理、特点、缺陷及未来发展趋势作系统的介绍和对比。 1、 传统 ES 打靶基因敲除——成熟、修饰准确、效果稳定,但制作周期长达一年 基于胚胎
。随后,才能进行杂合子小鼠的相互交配。注意点:-不同的 KO Founder 之间不能相互交配。-不同的 KO Founder 的子代之间也不建议相互交配。条件性基因敲除获得 flox 纯合同时 Cre 阳性的小鼠(f/+;Cre-)×(f/+;Cre+)→ f/f;Cre+Flox 小鼠在去除 Neo 基因以后(CRISPR/Cas9 途径获得的 CKO 小鼠省略此步骤),获得仅含有两个 loxP 位点的 flox 杂合子小鼠(flox/+,可缩写成 f/+)。 flox 杂合子(f/+)小鼠与组织
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