基因敲除小鼠

基因敲除小鼠定制服务流程

1. 需求沟通

专业技术顾问团队与您详细沟通定制需求，包括定制类型、具体基因以及交付情况等内容，确保精准理解您的研究目标。

2. 确定方案

专业技术团队针对您的定制需求进行个性化项目分析，制定专属实施方案，并与您沟通确认，敲定最终执行细节。

3. 合同签订

方案确认后，双方签订定制服务合同，明确权责、周期与交付标准，正式启动项目。

4. 项目执行

团队严格按照确定的分析方案及合同内容，推进基因敲除小鼠模型的构建工作。

5. 定期汇报

技术顾问会根据您的需求，定期向您同步项目进展，确保您随时掌握项目动态。

6. 模型交付

项目达到预定要求后，我们将提前通知您，完成模型交付的准备工作。

7. 项目完成

模型交付完成后，我们会出具项目结题报告，并提供小鼠后续饲养、繁育及鉴定建议。

 

TurboKnockout^®基因敲除：跨越“嵌合体”阶段且自删除Neo，减少两代繁育时间

基于ES打靶技术的TurboKnockout技术采用了独特的建系和基因改造技术，建立了具有高效遗传优势的TurboKnockout ES细胞系，通过特定胚胎发育阶段的显微注射，使TurboKnockout ES细胞100%代替内源ES细胞，从而实现跨越“嵌合体”阶段，把ES打靶构建周期缩短至快至4个月。且TurboKnockout采用独特的Self-deleting Neo Cassette，所获得的TurboKnockout小鼠与任何品系小鼠交配，都可以100%自删除Neo。即TurboKnockout不仅实现跨越“嵌合体”阶段，还能真正自删除Neo，从而快速获得去除Neo的杂合子小鼠。

 

TurboKnockout基因编辑技术优势

独立自主知识产权

TurboKnockout技术无专利纠纷困扰，是涉及新药研发项目的常用技术。

可进行大片段基因编辑

可胜任复杂的基因修饰，实现Mb级敲入及敲除，单次最大可敲入350kb的序列，ES细胞可耐受至多7轮打靶仍具有生殖系遗传，如构建全基因组人源化小鼠和人源化抗体小鼠。

无脱靶效应

TurboKnockout技术建立在传统ES打靶技术之上，没有脱靶效应，可通过PCR、染色体核型、southern blot检测，流式细胞术、RT-qPCR、WB等方式在细胞阶段进行项目表达检测，基因修饰准确、效果稳定。

周期更短

实现跨越“嵌合体”阶段且自删除Neo，减少两代繁育时间，构建周期快至4个月，同时，TurboKnockout可在ES水平做多步BAC重组，进一步缩短服务周期。

批量获得纯合子模型

优化的纯合ES克隆筛选系统结合囊胚前注射或四倍体补偿技术，可5个月批量获得纯合基因编辑小鼠。

品系选择灵活

赛业生物可提供C57BL/6NCya，C57BL/6JCya，BALB/cAnCya，129S2/SvPasCya等多品系选择。

 

常见问题解答

Q: 鉴定基因编辑鼠剪爪、剪尾组织量是多少？

根据实验经验，剪爪、剪尾应在出生后 7-12 天内完成，这样一方面既可避免母鼠吃仔，另一方面该时段的大小鼠容易抓取、出血较少，提取的基因组质量较高。

1. 鼠尾尾尖（<5mm）可获得足够量DNA用于基因型鉴定。

2. AAALAC要求断趾法，最好用于小于7日龄的新生鼠，断趾操作剪取的鼠爪量为鼠爪趾尖组织1-2mm。

 

Q 常见完全性基因敲除鼠如何鉴定？

两条引物进行基因型鉴定

1. 引物设计

将引物设计在敲除区域的两端，即F1和R2引物，通过条带大小判断基因型。

 

 

2. 预期片段大小

条带1的大小为：F1/R1扩增的野生型片段减去敲除片段；

条带2的大小为：F1/R1扩增的野生型片段；

 

注：如果不精提基因组或不使用高保真高扩增效率的聚合酶，一般大于2kb的条带会较难扩增。图示中敲除区域大于2kb时，野生型扩增不出条带，即无条带2。

 

3. 电泳结果

若电泳结果只有条带1，则判断为阳性纯合鼠（-/-）；

若电泳结果只有条带2，则判断为野生鼠（+/+）；

若电泳结果有条带1和条带2，则为阳性杂合鼠（＋/－）。

 

注：若条带2无法扩增，扩增出条带1只能判定为阳性鼠（杂合或者纯合）。

 

 

 

 

三条引物进行基因型鉴定

1. 引物设计

若是所用的酶可以扩增出野生型的片段，用上文中的F/R这对引物就可以鉴定出纯杂合。但当敲除的片段过大，而所用的酶无法扩增出野生型的条带时，F/R这对引物是不能区分F2代的纯杂合，所以需要再设计一条位于敲除区域内的引物，使用3条引物用短片段体系即可判断基因型。

 

 

 

 

2. 预期片段大小

条带1的大小为：F1/R1扩增的野生型片段减去敲除片段；

条带3的大小为：F1/R2扩增的野生型片段；

 

3. 电泳结果

若电泳结果只有条带1，则判断为阳性纯合鼠（-/-）；

若电泳结果只有条带3，则判断为野生鼠（+/+）；

若电泳结果有条带1和条带3，则为阳性杂合鼠（+/-）。

 

 

 

 

注：以上实验可以3条引物放在一个体系中扩增，也可以分为2个体系进行扩增。目的扩增片段一般都小于1kb，使用短片段体系即可。另，如果两对引物预期片段大小相差仅几十bp，在有实验误差的情况下，同一胶图可能较难区分两条条带，建议分成2个体系进行扩增，先判断是否阳性，再进一步判断纯杂合。

 

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