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- 2025年12月31日
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iTRAQ/TMT定量蛋白质组学技术
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是生物学领域应用广泛的两种蛋白质标记定量技术。该技术分别通过与多肽氨基末端以及赖氨酸残基伯氨基结合，实现对多肽的标记。在质谱分析时，不同样本的同一肽段标记后表现为相同的质荷比，被同时选择进行二级碎裂，产生质量不同的报告离子，通过报告离子的丰度实现不同样品间蛋白质的定量。
应用领域：
适用于不同样本的蛋白质组定量研究。
技术优点：
1.适用于各种动植物组织/细胞、微生物、体液样品分析
2.一次实验同时对多达2-10个样本进行定量分析
3.一次实验可获得高通量的定量数据
采用仪器：
iTRAQ/TMT技术流程：
样本经过不同处理后提取蛋白质，蛋白质经过还原，封闭后蛋白酶酶切（通常为trypsin），肽段混合物分别用不同的iTRAQ/TMT试剂标记，等量混合各种iTRAQ/TMT试剂标记的肽段， MS/MS质谱检测及分析。
数据分析内容：
1.数据库鉴定数据统计
2.蛋白质/肽段鉴定及定量结果
3.差异蛋白质统计分析
4.蛋白质Pathway代谢通路分析
及差异蛋白的Pathway富集分析
5.多样品间分类统计、功能富集、
聚类分析（适用于样本数≥3的项目）
样品要求:
蛋白提取物：≥100ug
细胞：≥107
组织：动物组织≥100mg,植物组织≥10mg
体液：血清/血浆≥500μL，尿液≥25mL，唾液、脑脊液等体液≥5ml
其他样本如有疑问请联系我们
参考文献：
1 Richard, D. U.et.al. Simultaneous analysis of relative protein expression levels across multiple
samples using iTRAQ isobaric tags with 2D nano LC–MS/MS.Nature Protocols 5,1574-1582(2010).
2 Josselin Noirel1. Methods in Quantitative Proteomics: Setting iTRAQ on the Right Track. Current Proteomics 2011, 8, 17-30.
3 Elias, J. E., Gygi, S. P. Target-decoy search strategy for increased confidence in large-scale
protein identifications by mass spectrometry. Nat Methods 2007, 4(3):207–214.
4 Altelaar A.F., et al. Benchmarking stable isotope labeling based quantitative proteomics. J Proteomics Oct 22. pii: S1874-3919(12)00704-X. doi: 10.1016/j.jprot.2012.10.009.
5 Zhang, T., et al. (2010). Improving quantitation of TMT-labeled peptides using stepped higher-energy collisional dissociation. Application note # 483www.thermoscientific.com
6 顾培明,李静. 应用Orbitrap Fusion对TMT标记样本进行MS2定量方法及SPS MS3定量方法的比较.塞默飞世尔（中国）有限公司.Application Notes CM0098.
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文献和实验共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白组学分析、SILAC/Dimethyl标记定量蛋白组分析、SWATH定量蛋白组学、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白组学分析。下面介绍两种比较常见的定量蛋白质组学技术。 iTRAQ定量蛋白质组学分析 iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation) 技术是由美国应用生物系统公司ABI研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，而后进
机理、细胞模式、功能联系等方面进行探索的科学。目前最新的iTRAQ蛋白定量分析技术在此基础上被提出，并被得到广泛应用。仅仅知道蛋白质的身份并不足以对蛋白质给出最终定论，因为蛋白质的浓度对于实现其在细胞中的功能来说极其重要，一种特殊蛋白质在浓度上的变化，就能预示细胞的突变过程。因此，科学家能够对蛋白质的相对和绝对浓度进行测量，是很重要的事情。过去，科学家通常先进行二维(2D)凝较电泳，切断条带，再用质谱方法测量条带中的蛋白质。可是，这种方法不是很理想：既不是非常敏感，也不是非常精确。新泽西医学及牙科
的自动搜索（SPIDER）和PTM鉴定技术整合了PTM和突变表征。 PEAKS可提供各种肽的完整序列，各个氨基酸序列的可信度评分，简单的高通量分析报告，以及其他信息。 PEAKS可以对多个数据库搜索引擎的结果进行比较。PEAKS inChorus会自动将测试结果同其他蛋白质ID搜索引擎（例如Sequest，OMSSA，X!Tandem和Mascot）进行交叉检查，这样可防止肽鉴定结果的假阳性。 PEAKS Q是一种用于蛋白质定量的附加工具，支持标记（ICAT, iTRAQ, SILAC, TMT
