DIGE荧光差异凝胶电泳结合MALDI质谱分析

DIGE荧光差异凝胶电泳技术特点及应用

DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品，并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性，可靠性和重复性。在DIGE技术中，每个蛋白点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异，统计学可信度达到95%以上。 荧光染料种类虽多，但用于蛋白质组样品标记的荧光染料不同于普通荧光

【资源】关于差异蛋白发现和鉴定的三种方法

的不同而对分离蛋白质进行分离。 DIGE是在传统2D的基础上，结合了多重荧光分析的方法，可在同一块凝胶上共同同时分离多个分别由不同荧光染料标记的样品，第一次的概念极大地提高了结果的准确性、可靠性和重复性。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异，统计学可信度达到95%以上。 三.LC－MS液质联用技术 [技术特点] 采用美国 Michrom MDLC/MS技术平台, 可实现复杂生物样品的液质联用快速分离和高灵敏度检测，用于补充替代蛋白质组学2D凝胶电泳分析。100%生物兼容

差异凝胶电泳

将样品在电泳前标记Cy2、Cy3 和Cy5 这3 种荧光染料,然后将标记后的3 种样品混合, 同时在一块胶上进行电泳,即为差异凝胶电泳(DIGE) 。所得到的2D 胶图像可使用3 种不同的激发P发射过滤器得到不同颜色荧光信号,根据这些信号的比例来判断样品之间蛋白质的差异,这样可避免在匹配时出现的误差,进行定量分析时也不依赖于胶与胶之间的重复性。用于标记的荧光基团在化学结构上相似,分子量也基本相同,都带有正电荷,所以在与赖氨酸残基反应时,保证了所有的样品可以移至相同的位置。该方法的灵敏