SILAC (Stable isotope labeling with aminoacids in cellculture) 即细胞培养条件下稳定同位素标记技术,其基本原理是在细胞培养时,采用含有轻、中、重同位素型必需氨基酸的培养基进行细胞培养(常用稳定同位素氨基酸Lys和Arg)。在细胞传代培养过程中,同位素氨基酸将被细胞用于合成蛋白质,细胞经传代培养5-6代后,细胞的所有蛋白质将被同位素标记,等量混合标记的蛋白质后经过分离和质谱分析,通过比较一级质谱图中三个同位素型肽段的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而鉴定蛋白质。由于SILAC标记技术是体内标记技术,几乎不影响细胞的功能,因此其在蛋白质组学相关领域中得到了广泛的应用。
参考文献: 1 Ong, S.E. & Mann, M. A practical recipe for stable isotope labeling by amino acids in cell culture (SILAC). Nat. Protoc. 1, 2650-2660 (2007).
2 Sobczyk GJ, Wang J, et al. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun.2014; 5: 3319.
3 3. Larance, M. et al. Stable-isotope labeling with amino acids in nematodes. Nature Methods. 8, 849-851 (2011).