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- Thermo scientific -fermentas
- ER1741
- 2025年09月22日
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|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | ||
| 10X Buffer O | 10X Buffer Tango™ | 50X oligonucleotide | ||||
| ER1741 | 250 u (5 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | 5 x 0.25 ml | ER1741 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| O +oligo | 37°C | 0-20 (+oligo) | 20-50 (+oligo) | 100 (+oligo) | 20-50 (+oligo) | 50-100 (+oligo) | 100 (+oligo) | 1X or 2X (+oligo) |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
41 切割位点
100%酶活性的反应条件
[1X 缓冲液O] + 1 μM寡核苷酸：
[50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA] + 0.5 µM寡核苷酸(见备注)。
37°C酶切。
[50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA] + 0.5 µM寡核苷酸(见备注)。
37°C酶切。
保存缓冲液
BveI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, �5°C), 150 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, �5°C), 150 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍BveI过量酶切后，超过90%的酶切产物可以连接和重新酶切。
备注
- BveI有效酶切要求底物DNA分子中至少有2个识别位点。
- 反应体系中加入0.5 μM寡核苷酸 (含有BveI识别序列)可极大地促进质粒DNA酶切效率，尤其是只有1个识别位点的底物DNA分子。BveI很难完全切割某些底物DNA。
- BveI浓度是底物DNA分子获得最大切割水平时对应的浓度，并且要保证此浓度不会改变酶切的带型。
- 低盐、pH> 8.0、高浓度甘油(>5%)或过量酶切都会导致星活性。
- BveI可能会吸附在切割的DNA分子上，从而改变DNA条带的电泳迁移率。为了避免出现非正常条带，上样电泳前，建议采用6X Loading Dye & SDS溶液(#R1151)处理样本，或者在 DNA酶切产物中加入SDS并加热处理。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 可能重叠 – 影响不确定。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 可能重叠 – 影响不确定。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...ACCTGm5C G ...3' |
部分影响 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0-20 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 41 | 3 | 3 | 1 | 1 | 0 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
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文献和实验相关实验
内切酶列表：Enzymes Generating 5‘-protruding Ends
A^CCGGT BshTI CCGG ACCTGC(4/8)^* BveI NNNN
（在 IVS-2 ， nt16 上也是 多态性SfaNI 位点 IVS-1 ，ntl(G-A) 地中海人 丢失BspMI 位点 移码6 地中海人 丢失CvnI 位点 IVS-2 ，nt745 地中海人 丢失RsaI 位点 －87
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