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NcoI

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER0571
  • 2025年10月01日
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      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : Tango™
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer Tango™
    ER0571 500 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0571
    ER0572 2500 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0572
    ER0575 1000 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0575
    ER0577 200 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0577
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    Tango™ 37°C 20-50 20-50 20-50 50-100 100 100 1X or 2X

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    4 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液Tango™:
    33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    NcoI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍NcoI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    低盐、pH> 8.0、高浓度甘油(>5%)或过量酶切都会导致星活性。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    AflIII, PscI, BtgI, Eco130I, FatI, PagI。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 无重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    0 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    4 0 0 0 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 0 0 0 1

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    图标文献和实验
    相关实验
    • 大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用

      材料   质粒pTrc-99B 大肠杆菌LeuRS 实验步骤   1. 突变体大肠杆菌LeuRS基因的构建 以构建的编码大肠杆菌LeuRS的基因leuS作为模板,利用两步PCR反应扩增得到六个LeuRS变种酶的基因序列(图1)。 第一轮PCR反应的5’和3’引物:引物1和引物4分别具有NcoI和HindIII酶切位点,构建各突变所用的引物如表1所示。PCR反应产物经用NcoI和HindIII

    • 创建轻链改组噬菌体文库

      纯化试剂盒芝之PCR产物。 5. 用XhoI和NcoI消化PCR产物;但除了用XhoI替代  NcoI,还需在NEB2缓冲液中进行消化。 6. 制备VL基因文库载体;但需用XhoI和NcoI消化载体。 7. 连接已消化的PCR产物和已消化的载体,并电转化到大肠杆菌TG1中,构建轻链改组文库。

    • Determining the Direction of Replication Fork Movement

      , with the enzyme of choice in various brands of agarose. The enzymes that cut to completion in Beckman LE agarose are AvaI, Bam HI, BglII, EcoRV, NcoI, PstI, PvuII, SacII, SnaBI, SpeI, StuI, XbaI and XhoI. (There are likely to be many others that also cut

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