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文献和实验大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用
材料 质粒pTrc-99B 大肠杆菌LeuRS 实验步骤 1. 突变体大肠杆菌LeuRS基因的构建 以构建的编码大肠杆菌LeuRS的基因leuS作为模板，利用两步PCR反应扩增得到六个LeuRS变种酶的基因序列(图1)。 第一轮PCR反应的5’和3’引物：引物1和引物4分别具有NcoI和HindIII酶切位点，构建各突变所用的引物如表1所示。PCR反应产物经用NcoI和HindIII
纯化试剂盒芝之PCR产物。 5. 用XhoI和NcoI消化PCR产物；但除了用XhoI替代 NcoI,还需在NEB2缓冲液中进行消化。 6. 制备VL基因文库载体；但需用XhoI和NcoI消化载体。 7. 连接已消化的PCR产物和已消化的载体，并电转化到大肠杆菌TG1中，构建轻链改组文库。
Determining the Direction of Replication Fork Movement
, with the enzyme of choice in various brands of agarose. The enzymes that cut to completion in Beckman LE agarose are AvaI, Bam HI, BglII, EcoRV, NcoI, PstI, PvuII, SacII, SnaBI, SpeI, StuI, XbaI and XhoI. (There are likely to be many others that also cut
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