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- Thermo scientific -fermentas
- ER1341
- 2025年09月30日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer B | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1341 | 250 u (5 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1341 | |
| ER1342 | 1250 u (5 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1342 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| B | 37°C | 100 | 0-20 | 0-20 | 0-20 | 20-50 | 0-20 | 1X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
2 切割位点
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 可能重叠 – 阻止酶切。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...GTTTAAAm5C G ...3' |
不阻止酶切 |
| CpG | 5'...m5C G TTTAAAm5C G ...3' |
不阻止酶切 |
| EcoKI (AAC(N)6 GTGC) | 5'...GTTTAAm6AC(N)6 G TGC...3' |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 20-50 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
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文献和实验Construction and Characterization of Adenovirus Vectors
using standard cloning procedures. Once obtained, the shuttle vector is linearized by digestion with PmeI and cotransformed into BJ5183 cells with the AdEasy backbone vector. After small-scale purification of DNA from BJ5183 cells
寡核苷酸微阵列法 该方法以已知CpG岛的序列分别设计能够与甲基 化和非甲基化CpG岛片段杂交的寡核苷酸探针微阵列，用于同时分析众多已知CpG位点的甲基化状态。样品基本处理步骤如下：DNA经MssI(酶切位点是GTTT)消化后用亚硫酸氢钠处理，再在酶切位点的粘性末端加上接头，用通用引物进行PCR扩增、荧光素标记、微阵列杂交及扫描。该方法的优点是能直接得到目标CpG岛的甲基化信息。缺点是有这种合成的芯片容量不是很大，目前只能检测约80个CpG岛的甲基化状态
,7 PmeI GTTT/AAAC BbeI GGCGC/C PmlI CAC/GTG BbvCI CCTCAGC,-5,-2 PpiI GAA***NNNCTC,13,8 BclI T/GATCA Ppu10I A/TGCAT BfrBI ATG/CAT PpuMI RG/GWCCY BglI GC***NN/NGGC PshAI GA***/NNGTC Bpu10I CCTNAGC,-5,-2 PsiI TTA/TAA BsaAI YAC/GTR PspOMI G/GGCCC BsaHI
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