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MlsI (MscI)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1211
  • 2025年10月03日
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      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : R
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - Dcm甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer R 10X Buffer Tango™
    ER1211 200 u (5 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER1211
    ER1212 1000 u (5 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER1212
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    R 37°C 0-20 20-50 0-20 100 20-50 50-100 1X or 2X

    Lambda DNA (dcm- )
    0.7%琼脂糖
    18 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液R:
    10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    MlsI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍MlsI过量酶切后,超过90%的酶切产物可以连接,超过95%的连接产物能重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要20 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • 底物为λ DNA (dcm- ) (#SD0021)。
    • 重叠的Dcm甲基化抑制MlsI酶切。为了避免Dcm甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
    CpG: 无重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...TGGCm5CA GG ...3'
    3'...ACCG GTm5CC ...5'

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    0-20 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    18 0 1 1 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 0 0 0 2

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      请问有哪些原核表达载体的mcs含有以下三个以上以下的酶切位点。谢谢 AarI CACCTGC,4,8 MfeI C/AATTG AatII GACGT/C MluI A/CGCGT AccI GT/MKAC MmeI TCCRAC,20,18 AceII GCTAG/C MscI TGG/CCA AclI AA/CGTT NaeI GCC/GGC AfeI AGC/GCT NarI GG/CGCC AflII C/TTAAG NdeI CA/TATG AgeI

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