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FastDigest® PflMI (Van91I)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • FD0714
  • 2025年09月30日
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      大量

    • - 推荐的缓冲液 : FastDigest®缓冲液
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率90%
    • - Dcm甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 10 min
    • - 重组酶
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X FastDigest® Buffer 10X FastDigest® Green Buffer
    FD0714 100 µl (100 react.) 1.00 ml 1.00 ml FD0714
    Reaction conditions
    Reaction temperature Digestion time with 1µl of FastDigest® enzyme, min bp from end of DNA required for complete digestion Thermal inactivation Incubation time without star activity, hours
    Lambda, 1µg/20µl Plasmid DNA, 1µg/20µl PCR product, ~0.2µg/30µl Genomic DNA, 1µg/10µl
    37°C 5 5 5 5 3 65°C, 10 min 6

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    14 切割位点

    配方
    1 µl (1 FDU)是指在37°C,1X FastDigest® 缓冲液中5分钟内酶切1 µg lambda DNA所需的酶量。

    推荐反应条件
    1X FastDigest®缓冲液或 1X FastDigest® Green 缓冲液,37°C。
    1 µl FastDigest® PflMI (Van91I)可在
    – 5分钟内酶切1 µg lambda DNA;
    – 5分钟内酶切1 µg质粒DNA;
    – 5分钟内酶切0.2 µg PCR扩增产物;
    – 5分钟内酶切1 µg基因组DNA或30分钟内酶切5 µg基因组DNA。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
    CpG: 无重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...Cm5CA GG (N)3 TGG...3'
    3'...G GTm5CC (N)3 ACC...5'

    阻止酶切
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    14 2 0 2 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 0 0 1 4

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