• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞

        德国IBA Lifesciences

        1655

        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞


        通过 TCR 与 MHC 多肽复合物间的特异性识别作用,可以对抗原特异性 T 细胞进行检测和分离。然而,当 MHC 多肽复合物为单体状态时,其与 T 细胞的结合并不稳定。若将其四聚体化后,其与 TCR 的结合可保持在一个稳定的状态,成为检测的工具。德国 IBA Lifesciences 研发的 MHC I STREPTAMERS® 技术,利用了这一特点,将传统的链霉亲和素改进为 Strep -Tactin®,搭配荧光标记或纳米磁珠,与多聚化的低亲和力MHC I-Streps 形成复合体,实现了对抗原特异性 (CD8+ T) 细胞的检测和分离 (如,流式分析) 。此技术的特点在于,荧光或磁性微珠等标记物可以通过使用 Biotin (生物素) 而去除,保留了细胞的真实特性,得到的功能性的,label-free 的细胞可用于下游的实验研究。

        1) MHC I STREPTAMERS® 技术解析

        MHC I STREPTAMERS® 由两部分组成:

        · MHC I-Strep,即连接了 Twin-Strep-tag® 和抗原肽的 MHC I 分子。

        · 荧光 (PE/APC) 或磁性微珠标记的 Strep-Tactin® multimer

        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞
        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞
        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞

        图 1.1 通过磁珠标记的MHC I STREPTAMERS®进行细胞分离


        2) MHC I STREPTAMERS® 核心优点

        · 多价结合,提供了精准的标记和高染色强度

        · 多种选择,可从 60 余种 MHC I Streptamers 与相应多肽进行选择

        · 模块化产品,适用于 FACS 分析与磁性细胞分选

        · 试剂可逆,保证了选后细胞的完整功能

        3) 实验流程

        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞

        细胞染色步骤:

        1.调整细胞浓度为 1x107cells/ 100 μl,从中取 1 - 2x106 cells;

        2. 用去离子水将 10xBuffer IS 稀释为 1x,准备 3 ml 稀释后的 Buffer IS;

        3.取 1ul Strep-Jactin®PE 或 Strep-Tactin®APC,0.8μl MHC I-Strep,与 1x Buffer IS 混匀为 10ul 的终体积,冰上孵育 45 分钟;

        4.将上一步孵育完的 Streptamers 复合物加入到细胞悬液中轻轻吹打混匀,冰上孵育 45 分钟;

        5.加入 200ul 1x Buffer IS 洗涤细胞 2 次;

        6.染色结束的细胞可上流式就行分析或者分选(死细胞可用 PI 或 7 -AAD 排除)。

        注意:

        ①在实验之前所有试剂均应该放在冰上或 4℃ 提前预冷,实验过程中亦如此;

        ②如果以上试剂用量不合适于本次实验样本,可进行滴定。具体操作为:仍然调整细胞浓度为 1x10' cells/ 100 μl,倍比增加 Streptamers 复合物的用量与 1 - 2x106 细胞悬液进行孵育,如下:

        2 倍 Streptamers 用量(1.6 μl MHC I-Strep +2 μl Strep-Tactin® PE in 20 ul buffer IS)

        3 倍 Streptamers 用量(2.4 μl MHC I-Strep +3 μl Strep-Jactin® PE in 30 μl buffer IS)

        4 倍 Streptamers 用量(3.2 μl MHC I-Strep +4 μl Strep-Jactin® PE in 40 μl buffer IS)


        Streptamers 的解离:

        1.350 gx5 min 离心收集细胞;

        2.同时,用 1xBuffer IS 稀释 D-Biotin 到 1 mM 的工作浓度,准备 1 ml,放置于冰上;

        3.向离心后的细胞中加入 200μl D-Biotin 工作液,冰上孵育 10 分钟;

        4.孵育结束离心收集细胞;

        5 重复步骤 3 和 4 -遍:

         

         

        热销产品列表

        Research field

        Allele

        Antigen

        Sequence

        Cat. No.

        Human

        Cytomegalovirus (CMV)

        HLA-undefined 0201

        CMV pp65

        NLVPMVATV

        6 - 7001 - 001

         

        HLA-undefined 0702

        CMV pp65

        TPRVTGGGAM

        6 - 7027 - 001

         

        HLA-undefined 2402

        CMV pp65

        QYDPVAALF

        6 - 7028 - 001

         

        HLA-undefined 1101

        CMV pp65

        GPISGHVLK

        6 - 7050 - 001

         

        HLA-undefined 0101

        CMV pp50

        VTEHDTLLY

        6 - 7024 - 001

         

        HLA-undefined 0801

        CMV IE- 1

        QIKVRVDMV

        6 - 7017 - 001

         

        HLA-undefined 0201

        CMV IE- 1

        VLEETSVML

        6 - 7041 - 001

        Tumor

        HLA-undefined 0201

        WT- 1 (Wilms tumor protein)

        RMFPNAPYL

        6 - 7019 - 001

         

        HLA-undefined 0201

        HA- 1 H

        VLHDDLLEA

        6 - 7018 - 001

         

        HLA-undefined 0201

        MART 1

        VLQELNVTV

        6 - 7007 - 001

         

        HLA-undefined 0201

        NY-ESO- 1

        (cancer-testis antigen)

        SLLMWITQV

        6 - 7013 - 001

        Epstein-Barr virus (EBV)

        HLA-undefined 0201

         

        EBV BMLF- 1

        GLCTLVAML

         

        6 - 7002 - 001

         

        Influenza

        HLA-undefined 0201

        Influenza A virus M1 protein

        GILGFVFTL

        6 - 7003 - 001

        HIV

        HLA-undefined 0201

        HIV- 1 reverse transcriptase

        ILKEPVHGV

        6 - 7005 - 001

        Mouse

        Transgenic mouse OVA model

        H- 2 Kb

        Ovalbumin

        SIINFEKL

        6 - 7015 - 001

         

        4) 实验数据

        -高染色强度:使用可逆的MHC I STREPTAMERS®染色抗原特异性 (CD8 + T) 细胞

        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞
        STREPTAMERS® 的高染色强度,可以最佳化的检测到小型T细胞群体。对 CMV-specific CD8+ T 细胞使用 HLA-undefined 0201 CMV pp65495 - 503 Streptamer® 进行体外染色 (右),并与常规多聚体 (左) 进行染色效果对比。染色使用 CMV 阳性个体在 4℃ 下进行。


        -染色试剂可逆:染色小鼠抗原特异性 (CD8 + T) 细胞后,再去掉染色。

        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞
        使用H2 -Kd/LLO91 - 99 Streptamers®染色Listeria monocytogenes, epitope LLO91 - 99 CD8+ T 细胞。用与 LLO91 - 99 特异的 MHC I-Strep H2 -Kd 偶联 Strep-Tactin®PE 观察抗原特异性细胞。 加入 1 mM d-biotin,在不同的时间点监测单体 MHC 分子的后续解离。 加入 biotin后 20 分钟,染色试剂从细胞中大量去除。 染色和解离在 4℃ 进行。


        -染色试剂可逆:染色人抗原特异性 (CD8 + T) 细胞后,再去掉染色。

        MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞
        与传统的多聚体相比,使用 HLA-A * 0201 / Her2 / neu369 - 377Streptamers®染色 Her2 / neu 特异性 CD8 + T 细胞在 1 mM d-生物素存在下短暂孵育后,显示出 Streptamer®染色剂与细胞的完全解离 (右)。 抗原特异性 T 细胞通过与与 Her2 / neu369 - 377 特异的 MHC I-Strep HLA-A * 0201 偶联的 PE 进行观察。 在 4℃ 下进行染色和解离。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序