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- Thermo scientific -fermentas
- ER1271
- 2025年09月30日
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|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1271 | 1000 u (10 u/µl) | 1.00 ml | ER1271 |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| Tango™ | 37°C | 20-50 | 100 | 0-20 | 20-50 | 100 | 20-50 | 1X or 2X |
Lambda DNA
1.4%琼脂糖
17 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液Tango™：
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
MbiI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍MbiI过量酶切后，大约80%的酶切产物可以连接。由于MbiI识别序列不对称，不超过50%的连接产物能重新酶切。剩下的未切割连接产物可被Cfr42I (SacII)和Ecl136II (SacI)切割。
琼脂糖包埋DNA酶切
至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。
备注
低盐、pH> 8.0、高浓度甘油(>5%)或过量酶切都会导致星活性。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | GAGCGG |
部分影响 |
| CpG | 5'...m5C G AGCGG...3' |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 0-20 | 50-100 | ||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 17 | 1 | 4 | 2 | 3 | 3 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 4 | 4 | 5 | 5 | 3 | 2 |
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