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- Thermo scientific -fermentas
- ER1621
- 2025年09月29日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1621 | 100 u (10 u/µl) | 1.00 ml | ER1621 | |
| ER1622 | 500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | ER1622 |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| Tango™ | 37°C | 0-20 | 0-20 | 0-20 | 20-50 | 100 | 20-50 | 1X or 2X |
Lambda DNA
1.4%琼脂糖
169 切割位点
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
备注
- LweI可能会吸附在切割的DNA分子上，从而改变DNA条带的电泳纯移率。为了避免出现非正常条带，上样电泳前，建议采用6X Loading Dye & SDS溶液(#R1151)处理样本，或者在DNA酶切产物中加入SDS并加热处理。
- 至少需要两个拷贝的LweI识别位点才能保证有效酶切。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...GCATm5C G ...3' |
部分影响 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 20-50 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 169 | 12 | 7 | 22 | 8 | 9 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 4 | 5 | 4 | 4 | 17 | 16 |
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文献和实验Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆
的方法，但是比较贵。也可以用 Dpn l 37°C 酶切 PCR 产物 2 h 以去除模板质粒 DNA，从而省去了 15.3.2 中第（3 ) 步的电泳切胶的步骤，然后 PCR 产物用 QIAquick 方法回收。 5. 这个量可以根据所研究基因的大小成比例增加。加入到 PCR 反应 3 中的 PCR 反应 1 和 2 产物的相对量可以根据它们的分子质量大小进行适当调节。 6. PCR 反应 3 的循环数要降到最小，否则会影响文库的重复性（图 15. 3 )。这一步值得优化以在最小
【资源】【献给初学者】western blot操作步骤2012版
buffer（最好事前分装好，每次从冰箱里取一管即可），95~100°加热5min，若有沉淀可用稍低温度，比如45~55°加热1h达到变性的目的。我一般习惯分装20ul到PCR管里，先和loading buffer混合好，临用前用PCR仪加热95°C 5min，效果不错。 6、胶做好后连同玻璃板一起安装到电泳槽上，加入电泳缓冲液后开始准备上样（我们使用的是大连竞迈科技公司的MV-III型小型单垂直板电泳槽，电泳液至少要漫过内测的小玻璃板，电泳槽下面不用倒太多电泳液）。加样前可用5ml注射器或加样器先
时间，取适当体积样本混合1X SDS loading buffer（最好事前分装好，每次从冰箱里取一管即可），95~100°加热5min，若有沉淀可用稍低温度，比如45~55°加热1h达到变性的目的。我一般习惯分装20ul到PCR管里，先和loading buffer混合好，临用前用PCR仪加热95°C 5min，效果不错。 ⑥ 胶做好后连同玻璃板一起安装到电泳槽上，加入电泳缓冲液后开始准备上样（我们使用的是大连竞迈科技公司的MV-III型小型单垂直板电泳槽，电泳液至少要漫过内测的小玻璃板，电泳
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