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- Thermo scientific -fermentas
- FD0824
- 2025年09月28日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X FastDigest® Buffer | 10X FastDigest® Green Buffer | ||||
| FD0824 | 50 µl (50 react.) | 1.00 ml | 1.00 ml | FD0824 | |
| Reaction temperature | Digestion time with 1µl of FastDigest® enzyme, min | bp from end of DNA required for complete digestion | Thermal inactivation | Incubation time without star activity, hours | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Lambda, 1µg/20µl | Plasmid DNA, 1µg/20µl | PCR product, ~0.2µg/30µl | Genomic DNA, 1µg/10µl | ||||
| 37°C | 5 | 5 | 5 | 5 | 2 | 65°C, 5 min | 16 |
Lambda DNA (dam- )
1.4%琼脂糖
130 切割位点
1 µl FastDigest® MboII可在
– 5分钟内酶切1 µg lambda DNA dam- ;
– 5分钟内酶切1 µg质粒DNA;
– 5分钟内酶切0.2 µg PCR扩增产物;
– 5分钟内酶切1 µg基因组DNA或30分钟内酶切5 µg基因组DNA。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | 5'...GAAGm6A TC ...3' |
阻止酶切 |
| CpG | 5'...m5C G AAGA...3' |
不阻止酶切 |
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...TGm6AAGA(N)5 TGCT...3' |
不阻止酶切 |
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 130 | 11 | 11 | 11 | 7 | 8 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 9 | 9 | 8 | 8 | 15 | 11 |
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文献和实验体。 pGEM®-TEasy载体的多克隆位点区含有一些这样的限制性酶切位点，采用这些酶进行单酶切消化即可释放插入片段。如pGEM®-TEasy载体多克隆区的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位点。这种载体也可选用适当的双酶切消化释放插入片段。 pGEM®-TEasy载体含有丝状噬菌体f1复制起始子，可用于制备单链DNA(ssDNA参见第Ⅶ部分)。单链DNA分子对应于图1底部一条链，代表pGEM®-TEasy载体。 pGEM®-TEasy载体系统包含2×快速连接缓冲液，用于连接PCR产物。采用这种
，可溶解TrueGel3D™水凝胶以回收活细胞或化学固定细胞。例如，30 μL凝胶可用培养基1:20稀释的300 μL TrueGel3D™酶促细胞回收液溶解（37 °C孵育30-60分钟）。凝胶溶解后，细胞悬液离心，并用新鲜培养基或生理缓冲液重悬沉淀细胞。重复此洗涤步骤一两次，去除残留的TrueGel3D™酶促细胞回收液。如若细胞要再次进行葡聚糖水凝胶包埋并继续培养，除酶操作尤其重要。如果TrueGel3D™酶促细胞回收液没有彻底清除，会使新形成的水凝胶不稳定。 凝胶多样化制备的细节变动 制备
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含
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